Obtenção de formas detoxificadas de pneumolisina para inclusão em uma vacina anti-pneumocócica híbrida PspA-Ply

• Processo: 10/00744-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2010
• Data de Término da vigência: 30 de setembro de 2012
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Saúde Coletiva - Medicina Preventiva
• Pesquisador responsável: Michelle Darrieux Sampaio Bertoncini
• Beneficiário: Thais Raquel da Silva
• Instituição Sede: Universidade São Francisco (USF). Campus Bragança Paulista. Bragança Paulista , SP, Brasil
• Assunto(s): Vacinas Proteínas recombinantes
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: pneumolisina | proteína recombinante | S pneumoniae | Vacina | Vacinas

Resumo

Streptococcus pneumoniae (pneumococo) é um importante agente causador de pneumonia, meningite e septicemia. Trata-se de uma bactéria gram-positiva, cuja parede celular é coberta por uma cápsula polissacarídica de composição variável, responsável pela diferença sorológica entre os 90 tipos existentes, sendo o principal fator de virulência do pneumococo.Vacinas que utilizam polissacarídeos capsulares para conferir proteção, atuam induzindo imunidade T-independente, sem geração de memória imunológica e ineficazes para crianças menores de 2 anos. Por esse motivo foram desenvolvidas vacinas conjugadas contendo PS de 7-11 sorotipos prevalentes conjugados quimicamente a uma proteína carreadora, capazes de proteger crianças e adultos e diminuir a carga bacteriana na nasofaringe. Porém o alto custo e a cobertura limitada da vacina conjugada atual reforçam a necessidade de se desenvolver uma vacina mais abrangente e acessível. Diversas proteínas pneumocócicas têm sido estudadas como candidatos vacinais, pois podem conferir resposta timo-dependente, induzir clones de células de memória e proteger o hospedeiro da infecção por pneumococo de qualquer sorotipo capsular. Dentre estas proteínas, PspA e Pneumolisina (Ply) mostraram os resultados mais promissores em modelos de septicemia. PspA é um importante fator de virulência do pneumococo, exposto na superfície da bactéria e expresso por todas as linhagens de S. pneumoniae caracterizadas até o momento. Ply é uma toxina capaz de se ligar a TLR4 e possui diversas funções biológicas importantes, dificultando a invasão sistêmica do pneumococo através da apoptose das células do trato respiratório. A combinação destas duas proteínas apresentou o maior potencial protetor contra desafio sistêmico em camundongos. Porém, Ply apresenta elevada toxicidade celular, sendo necessária a utilização de formas detoxificadas para inclusão em uma vacina. O presente projeto propõe a obtenção de variantes detoxificadas de Ply, por mutagênese sítio dirigida. Serão obtidos mutantes em diferentes porções da proteína, os quais serão testados quanto à sua imunogenicidade e potencial de interagir com o sistema complemento. Os mutantes com melhor potencial imunogênico serão fusionados geneticamnete à região amino-terminal de PspA, para produção de proteínas quiméricas. A utilização de duas proteínas pneumocócicas, unindo o elevado potencial imunogênico de PspA ao efeito adjuvante de Ply, constitui uma estratégia vacinal promissora, capaz de induzir ampla imunidade protetora.