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Clonagem e expressao do fragmento "c" da toxina tetanica em fusao com a subunidade s1 da toxina pertussis em e.coli.

Processo: 00/03065-6
Modalidade de apoio:Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
Data de Início da vigência: 01 de junho de 2000
Data de Término da vigência: 30 de novembro de 2002
Área de conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
Pesquisador responsável:Ana Lucia Tabet Oller do Nascimento
Beneficiário:Amanda Lobarto Gimenez
Instituição Sede: Instituto Butantan. Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
Assunto(s):DNA recombinante   Tétano   Vacinas
Palavra(s)-Chave do Pesquisador:Dna Recombinante | Perfussis | Tetano | Vacinas

Resumo

Pretende-se obter um cassete de expressão em E. coli que potencialmente constituirá uma vacina dupla que deverá proteger contra tétano e pertussis. O fragmento C da toxina tetânica, por ser um imunógeno potente, será empregado na fusão da subunidade S1 da toxina pertussis na tentativa de aumentar a resposta imunoprotetora deste antígeno. Para tanto será empregado um vetor, desenvolvido neste laboratório, que contém o fragmento C clonado, sítios de restrição, códons de iniciação e terminação. Neste vetor será clonado o gene da subunidade S1 da toxina pertussis obtido pela técnica de PCR (Reação em Cadeia da Polimerase) a partir de um plasmídeo contento a toxina pertussis mutada e oligonucleotídeos complementares à seqüência de S1. A subunidade S1 será clonada em fusão tanto na extremidade amino como na carboxi-terminaí do fragmento C, na tentativa de expressar estes antígenos com o maior grau de imunogenicidade. Os genes clonados serão induzidos a expressar os polipetídeos correspondentes. As proteínas recombinantes expressas serão analisadas pelas técnicas de ELISA e Western blot na presença de anticorpos específicos para cada antígeno. (AU)

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