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Clonagem e expressao do fragmento c da toxina tetanica.

Resumo

O projeto propõe a obtenção do fragmento C da toxina tetânica por técnicas de DNA recombinante. A partir do DNA genômico de Clostridium tetani pretende-se amplificar a seqüência correspondente ao fragmento C pela técnica de PCR (Reação em Cadeia da Polimerize), utilizando oligonucleotídeos complementares. O inserto obtido será clonado em plasmódios e sua seqüência verificada. Estes plastídios serão utilizados para transformar bactérias (E. coli) e leveduras (Pichia pastoris), que posteriormente serão induzidas a expressar o polipeptídio correspondente à seqüência clonada. O polipeptídio expresso será analisado em gel de poliacrilamida-SDS e identificado com anticorpos anti-toxina pela técnica de Western blot. Após purificação a imunogenicidade será avaliada em camundongos inoculados com o fragmento C recombinante e desafiados com a toxina tetânica. Uma vez obtido o fragmento C recombinante ele será conjugado com polissacarídeos de interesse para vacinação, como por exemplo, o de Meningococus tipo C. A eficiência da conjugação será analisada pela resposta humoral de animais inoculados. Representará também o primeiro passo para a formulação de novas vacinas recombinantes. (AU)

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