Clonagem e expressao do fragmento c da toxina tetanica.

• Processo: 96/02568-7
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 1996
• Data de Término da vigência: 31 de março de 1999
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Ana Lucia Tabet Oller do Nascimento
• Beneficiário: Ana Lucia Tabet Oller do Nascimento
• Instituição Sede: Instituto Butantan. Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Bolsa(s) vinculada(s): 98/05889-4 - Clonagem e expressão do fragmento C da toxina tetânica em E. coli e Pichia pastoris, BP.TT; 97/02671-5 - Clonagem e expressão do fragmento C da toxina tetânica em E. coli e Pichia pastoris, BP.TT
• Assunto(s): DNA recombinante Toxina tetânica
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Dna Recombinante | Fragmento C | Toxina Tetanica

Resumo

O projeto propõe a obtenção do fragmento C da toxina tetânica por técnicas de DNA recombinante. A partir do DNA genômico de Clostridium tetani pretende-se amplificar a seqüência correspondente ao fragmento C pela técnica de PCR (Reação em Cadeia da Polimerize), utilizando oligonucleotídeos complementares. O inserto obtido será clonado em plasmódios e sua seqüência verificada. Estes plastídios serão utilizados para transformar bactérias (E. coli) e leveduras (Pichia pastoris), que posteriormente serão induzidas a expressar o polipeptídio correspondente à seqüência clonada. O polipeptídio expresso será analisado em gel de poliacrilamida-SDS e identificado com anticorpos anti-toxina pela técnica de Western blot. Após purificação a imunogenicidade será avaliada em camundongos inoculados com o fragmento C recombinante e desafiados com a toxina tetânica. Uma vez obtido o fragmento C recombinante ele será conjugado com polissacarídeos de interesse para vacinação, como por exemplo, o de Meningococus tipo C. A eficiência da conjugação será analisada pela resposta humoral de animais inoculados. Representará também o primeiro passo para a formulação de novas vacinas recombinantes. (AU)