Viabilizacao da producao recombinante do peptideo tf4 em e.coli.

• Processo: 03/10790-7
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de janeiro de 2004
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2004
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
• Pesquisador responsável: Ana Paula Ulian de Araujo
• Beneficiário: Gustavo de Campos Molina
• Instituição Sede: Instituto de Física de São Carlos (IFSC). Universidade de São Paulo (USP). São Carlos , SP, Brasil
• Assunto(s): Genes sintéticos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Genes Sinteticos | Peptideo Recombinante | Producao Heterologa | Toxina De Escorpiao

Resumo

A produção de peptídeos recombinantes surgiu como uma alternativa interessante à síntese química, já que virtualmente não há limitações para o tamanho máximo do peptídeo a ser produzido, além de não apresentar contaminantes da síntese. Um dos grandes problemas enfrentados pela produção recombinante em sistemas heterólogos está na estabilidade de polipeptídeos pequenos. Para contornar essa dificuldade, serão utilizadas diferentes proteínas carregadoras como fusão na estratégia para a produção do polipeptídeo alvo Tf4 (uma neurotoxina do escorpião Tityus fasciolatus) a ser produzido em E. coli. Oligonucleotídeos que codificam partes das seqüências do peptídeo serão sintetizados e usados na montagem dos fragmentos da seqüência gênica sintética. Para uma purificação conveniente, em todas as construções, o produto expresso será unido a um hexapeptídeo de histidinas para posterior separação em resina de afinidade, embora etapas cromatográficas complementares possam ser realizadas; Esse peptídeo natural pode ser isolado do veneno de escorpiões em baixas quantidades. Portanto, expressá-lo de forma heteróloga terá grande utilidade na produção de altas quantidades destas toxinas e facilitará a produção de mutantes. Desta forma, poderiam ser viabilizados estudos estruturais que permitem o entendimento mais detalhado de suas interações e modo de ação. (AU)