Insertion of enhancer elements in the pcl retrovirus to elevate expression in vivo.

• Processo: 98/00714-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de junho de 1998
• Data de Término da vigência: 31 de maio de 2001
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Bryan Eric Strauss
• Beneficiário: Bryan Eric Strauss
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Expressão gênica
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Expressao Genica

Resumo

Transferência gênica mediada por retrovirus é uma ferramenta extremamente eficiente para o estudo funcional do produto de um cDNA exógeno, em cultura de célula e in vivo. Nós temos usado o sistema pCL de retrovírus para a rápida e eficiente produção de vírus codificadores de genes supressores de tumor, incluindo p16, p21, p53 e Rb. O efeito supressor da proliferação celular imposto por estes vetores tem sido intensamente utilizado para a análise do programa de transformação de células derivadas de glioblastoma humano, tanto em ensaios in vitro quanto em modelos animais. Apesar do sucesso do sistema pCL para a produção de partículas virais com efeito citotóxico, a expressão in vivo do transgene pode ser melhorada. Nós desejamos estudar a dinâmica de transferência gênica e a função dos genes supressores de tumor in vivo. Nesta proposta, eu pretendo inserir elementos conhecidos como enhancer nos vetores do sistema pCL, com o objetivo de elevar a expressão do cDNA exógeno dirigida pelo promotor 5'LTR. Utilizando a proteína GFP (green fluorescent protein) como um marcador das células transduzidas (infectadas), nós poderemos observar espacialmente e dinamicamente a eficiência do processo de transferência e expressão gênica in situ, mediada pelos vetores enhanced-pCL. Através de medidas de citometria de fluxo e imunohistoquimica, a funcionalidade do transgene ao nível de controle de ciclo celular e dos respectivos efetores downstream também será avaliada. Um ponto crítico deste projeto está no estabelecimento de um modelo animal informativo. Eu proponho a utilização de glioblastoma como modelo para testes in vivo. O desenvolvimento de gliomas no cerébro de ratos é um sistema biológico adequado e relevante para o estudo da transferência e funcionalidade in vivo de genes supressores de tumor. As informações produzidas neste projeto poderão ser imediatamente aplicadas a outros modelos animais. Em um futuro próximo, a tecnologia construída neste projeto também poderá ser transferida para protocolos clínicos de terapia gênica de tumores sólidos. (AU)