Clonagem e sequenciamento da endo-oligopeptidase A

• Processo: 94/06147-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de março de 1995
• Data de Término da vigência: 31 de agosto de 1997
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Antonio Carlos Martins de Camargo
• Beneficiário: Mirian Akemi Furuie Hayashi
• Instituição Sede: Instituto Butantan. Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Clonagem | Endo-Oligopeptidase A | Neuropeptideos | Peptideos Opiodes | Protease | Sequenciamento

Resumo

A endo-oligopeptídase A, isolada do citosol de cérebro de coelho por Camargo e cols. (1973), é capaz de inativar a bradicina e a neurotensina hidrolizando as ligações Phe-Ser e Arg-Arg, respectivamente. Além disto, libera encefalinas a partir de precursores maiores através de uma única clivagem, sugerindo a sua importância na modulação da atividade de peptídeos biologicamente ativos. Apesar dos diversos trabalhos publicados relatando as suas características bioquímicas ainda não foi possível a determinação de sua estrutura primária (seqüência de aminoácidos) devido às dificuldades encontradas na purificação desta endopeptidase. Visando a obtenção da seqüência primária e de maiores quantidades da proteína através de expressão em bactérias, optou-se pela técnica de clonagem e seqüenciamento do cDNA isolado de biblioteca de cDNA de cérebro de coelho utilizando-se, anticorpos policlonais monoespecífico produzidos contra a endo-oligopeptidase purificada até a homogeneidade aparente. (AU)