Expressão heterológa, purifição e estudos de atividade de uma proteína inibidora de cisteíno protease de cana de açúcar e posterior evolução in vitro pela técnica de DNA shuffling

• Processo: 02/06311-3
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado Direto
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2002
• Data de Término da vigência: 31 de agosto de 2004
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Flavio Henrique da Silva
• Beneficiário: Andrea Soares da Costa Fuentes
• Instituição Sede: Centro de Ciências Biológicas e da Saúde (CCBS). Universidade Federal de São Carlos (UFSCAR). São Carlos , SP, Brasil
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Cana-De-Acucar | Cistatina | Cisteino Protease | Dna Shuffling | Evolucao In Vitro | Inibidor

Resumo

Cistatinas são proteínas que inibem especificamente cisteíno proteases. Estas proteínas são encontradas em várias espécies vegetais e atuam como parte de um mecanismo de defesa natural das plantas contra o ataque por patógenos. Os cDNAs SCCCRZ2001GO9, SCSFHR1043A02 E SCSFST3081D05, que codificam prováveis cistatinas, foram identificados em cana-de-açúcar e apresentam significativa similaridade com a proteína Orizacistatina II do arroz. Este trabalho objetiva expressar em bactérias a proteína codificada no clone SCCCRZ2001G09, purificá-la, realizar estudos estruturais e testes de atividade contra proteases e antifúngica. Além disso, cDNAs homólogos que também codifiquem proteínas inibidoras de cisteíno protease, serão utilizados para experimentos de recombinação de DNA in vitro pelo processo de "DNA shufflíng", para seleção de proteínas com propriedades melhoradas através de ensaios de atividade com extrato bruto e ensaios de atividade inibidora de cisteíno protease com os híbridos formados. Desta forma este projeto poderá contribuir para o estudo de uma proteína da cana-de-açúcar com função de defesa e obtenção de quimeras com propriedades melhoradas através da técnica de evolução in vitro. (AU)