Investigação da função da proteína THI4 frente a lesões no genoma mitocondrial de Saccharomyces cerevisiae

• Processo: 00/05567-9
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 2000
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2004
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Carlos Frederico Martins Menck
• Beneficiário: Renata Medina da Silva
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 98/11119-7 - Reparo de DNA lesado e conseqüências biológicas, AP.TEM
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Dna Mitocondrial | Dna Polimerase | Mutagenese | Reparo De Dna | Tiamina

Resumo

O gene THI1 de Arabidopsis thaliana foi clonado por sua capacidade de complementar fenótipos bacterianos deficientes em mecanismos de reparo. Ele mostrou homologia a genes de outros organismos envolvidos na síntese de tiamina e restaurou a prototrofia a esta vitamina de uma cepa de Saccharomyces cerevisiae mutante para o seu homólogo THI4. Esta cepa foi ainda submetida a tratamentos com agentes genotóxicos, nos quais uma aumentada freqüência de mutantes respiratórios foi observada. Em função destes dados apontarem para um possível envolvimento de THI4 na estabilidade do genoma mitocondrial de leveduras, vários testes passaram a ser feitos com THI1. Resultados de ensaios in vitro e in vivo têm mostrado uma função relacionada à síntese translesão do genoma de organelas, mecanismo de tolerância a lesões eucariótico ainda não descrito. Com base nestes dados, o presente trabalho se propõe a investigar o comportamento do gene THI4 frente a lesões induzidas por agentes genotóxicos no genoma mitocondrial de S. cerevisiae. As abordagens experimentais a serem utilizadas incluem testes de complementação em bactérias deficientes em enzimas de reparo, em leveduras thi4 e deficientes em DNA polimerases, ensaios de polimerização in vitro com a proteína Thi4, além de análises de remoção de lesões e velocidade de replicação do genoma mitocondrial de leveduras thi4, por QPCR. (AU)