Caracterização por espectroscopia de fluorescência de mutantes de triptofanos em uma Ca+2 ATPase de retículo endoplasmático

• Processo: 96/08730-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de dezembro de 1996
• Data de Término da vigência: 29 de fevereiro de 2000
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Morfologia
• Pesquisador responsável: Sergio Verjovski Almeida
• Beneficiário: Eduardo Moraes Rego Reis
• Instituição Sede: Instituto de Química (IQ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 95/09467-9 - Estrutura e função de ATPases, AP.TEM
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Ca+2 Atpase | Expressao Heterologa | Fluorescencia | Levedura | Mutagenese Sitio Dirigida

Resumo

Pretende-se neste trabalho avaliar a contribuição de resíduos triptofanilos específicos para a variação na fluorescência intrínseca da Ca2+ATPase de retículo sarcoplasmático (SR) de coelho observada durante a ligação reversível do cálcio (Dupont, 1976; Verjovski-Almeida, 1981). Mutantes da SR Ca2+ATPase nativa com substituições em resíduos Trp serão gerados por mutagênese sítio-dirigida e expressos em levedura utilizando um vetor de expressão controlada indutível por choque térmico. A inserção de uma seqüência de hexa-histidina na extremidade N-terminal da SR Ca2+ATPase mutante permitirá a sua purificação por cromatografia de afinidade com o grau de pureza necessário à obtenção das medidas de fluorescência pretendidas. (AU)

Publicações acadêmicas

(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

REIS, Eduardo Moraes Rego. Expressão em levedura e purificação da Ca2+ATPase do retículo sarcoplasmático de coelho. 2000. Tese de Doutorado - Universidade de São Paulo (USP). Conjunto das Químicas (IQ e FCF) (CQ/DBDCQ) São Paulo.