Isolamento e caracterização do gene p30 de amastigotas de Leishmania (L.) amazonensis

• Processo: 00/02927-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de maio de 2000
• Data de Término da vigência: 31 de março de 2003
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Parasitologia - Protozoologia de Parasitos
• Pesquisador responsável: Clara Lúcia Barbiéri Mestriner
• Beneficiário: Fernanda Lasakosvitsch Castanho
• Instituição Sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Amastigotas | Cisteina Proteinase | Leishmania (L) Amazonensis | P30

Resumo

As tentativas de clonagem do gene que codifica um antígeno de 30 kDa de amastigotas de Leishmania (L.) amazonensis (denominado p30), capaz de induzir respostas parcialmente protetoras mediadas por linfócitos CD4+ TH1 em camundongos BALB/c e que apresenta atividade de cisteína proteinase, levaram ao isolamento de um clone de 1.08 kb. A análise da seqüência de nucleotídeos desse clone mostrou que ele apresenta uma alta identidade com genes que codificam cisteína proteinases de outras espécies de Leishmnaia descritos na literatura. Os dados obtidos até o momento não nos permitem concluir se o clone de 1.08 kb representa o gene p30. Visando à caracterização do gene p30, os principais objetivos do presente projeto são: a) clonagem dirigida do gene de 1.08 kb de amastigotas de Leishmania (L.) amazonensis em vetor de expressão pGEX 3XT; b) análise da seqüência dos clones recombinantes; c) análise da proteína recombinante expressa em pGEX 3XT; d) isolamento do gene p30 a partir de uma genoteca de cDNA de L. (L.) amazonensis constmída em lambda gt11 por seleção imunológica; e) clonagem do gene p30, seqüenciamento e expressão da proteína recombinante. (AU)