Caracterizacao estrutural e funcional e uma proteinase tiolica de frutos de bromelia fastuosa: analise funcional e estrutural comparativa com papaina e bromelinas.

• Processo: 01/03912-3
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de julho de 2001
• Data de Término da vigência: 30 de junho de 2005
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Biofísica
• Pesquisador responsável: Gustavo Orlando Bonilla Rodriguez
• Beneficiário: Hamilton Cabral
• Instituição Sede: Instituto de Biociências, Letras e Ciências Exatas (IBILCE). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de São José do Rio Preto. São José do Rio Preto , SP, Brasil
• Assunto(s): Cristalização Peptídeo hidrolases Bromelaínas Cinética enzimática Papaína
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Bromelinas | Cinetica Enzimatica | Cisteino-Pepitidases | Cristalizacao | Papaina | Proteinases

Resumo

Durante a execução do projeto pretendemos dar continuidade ao trabalho executado durante o mestrado defendido em 21/3/2001 relativo a uma enzima de frutos de gravata, denominada por nós de brofasina. Em termos estruturais: 1) completaremos a determinação da seqüência primária da proteinase, 2) determinaremos a seqüência do gene codificador, 3) tentaremos a cristalização e resolução da estrutura, 4) estudaremos o efeito de glicosaminoglicanos e agentes tiólicos sobre a estrutura secundária, 5) estudaremos a desnaturação por uréia. Os itens 4 e 5 serão analisados por dicroismo circular. Se as tentativas de cristalização não forem bem-sucedidas tentaremos estabelecer colaboração para execução de RMN. No que se refere aos aspectos funcionais 1) faremos o mapeamento dos subsídios do sítio ativo, 2) determinaremos os parâmetros cinéticos de formação e desdobramento do complexo ES , 3) o efeito de glicosaminoglicanos sobre a atividade funcional. Como objetivos secundários tentaremos a cristalização das bromelinas do abacaxi (Ananas comosus) e a clonagem do gene da brofasina. Ao longo do projeto nossos referenciais de estrutura e função serão a papaína, que dá origem à família de proteinases à qual a enzima pertence, e as bromelinas do abacaxi, cuja seqüência é próxima da obtida parcialmente para a brofasina. O trabalho será co-orientado pelo Professor Dr. Luiz Juliano Neto da UNIFESP. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

CABRAL, H.; LEOPOLDINO, A. M.; TAJARA, E. H.; GREENE, L. J.; FACA, V. M.; MATEUS, R. P.; CERON, C. R.; SOUZA JUDICE, W. A. DE; JULIANO, L.; BONILLA-RODRIGUEZ, G. O.. Preliminary functional characterization, cloning and primary sequence of Fastuosain, a cysteine peptidase isolated from fruits of Bromelia fastuosa. PROTEIN AND PEPTIDE LETTERS, v. 13, n. 1, p. 83-89, Jan. 2006. (98/05967-5, 00/04932-5, 03/00085-4, 01/03912-3)

Publicações acadêmicas

(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

CABRAL, Hamilton. Análise funcional e estrutural comparativa da fastuosaina com papaína e bromelinas. 2005. Tese de Doutorado - Universidade Estadual Paulista (Unesp). Instituto de Biociências Letras e Ciências Exatas. São José do Rio Preto São José do Rio Preto.