Aspectos da congelacao do semen de cao.

• Processo: 98/00475-7
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 1998
• Data de Término da vigência: 31 de janeiro de 2002
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: Maria Denise Lopes
• Beneficiário: Isabel Candia Nunes da Cunha
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu , SP, Brasil
• Assunto(s): Sêmen Congelamento Centrifugação Cães
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Cao | Centrifugacao | Congelacao | Glicina Gema | Semen | Tris-Acido Citrico

Resumo

Serão utilizados ejaculados de 10 cães, adultos, porte médio, após atestada a sanidade clínica e reprodutiva de cada animal. O sêmen será coletado através de manipulação digital e o ejaculado recolhido em um funil de mucosa plástica aquecidos a 35ºC. Serão realizadas três etapas experimentais, sendo, cada fase, pré-requisito para a continuidade do projeto. Experimento 1- Efeito da centrifugação sobre o sêmen canino- serão utilizados 10 ejaculados, que após análise inicial, serão divididos em quatro amostras e centrifugado durante 5 minutos a 750-800g, sendo: GCC (n=10) o sêmen não será centrifugado; GCD (n=10) o sêmen será centrifugado sem meio diluidor; GK (n=10) grupo centrifugado com meio à base de leite e glicose 1:1; GF (n=10) grupo centrifugado com meio de Histopaque* 1:1. Após a centrifugação e ressuspensão em meio à base de leite e glicose, serão avaliados a motilidade e o vigor espermático e a integridade das membranas espermáticas através da utilização de sondas fluorescentes. Serão realizadas novamente os mesmos testes de viabilidade espermática 30 minutos após a centrifugação. Experimento 2- Efeito do tempo de equilíbrio sobre o sêmen canino- serão utilizados 10 ejaculados. Após análise inicial, o sêmen será dividido em dois grupos e, centrifugados ou não, dependendo dos resultados obtidos no experimento 1, sendo os grupos: TGG (n=10) sêmen diluído com meio à base de Tris, ácido cítrico, glicose, gema de ovo e OEP, com 7%-de glicerol; GGG (n=10) sêmen diluído com meio à base de glicina gema, com 6% de glicerol. Após as diluições, cada amostra será envasada em palhetas francesas de 0,5ml e levadas ao refrigerador (5ºC) acondicionadas em saco plástico contendo ar aquecido a 37ºC, que serão rompidos após 40 minutos do período de equilíbrio. Serão analisadas amostras após 40, 60, 75 e 90 minutos de período de equilíbrio, quanto à motilidade e vigor espermáticos e integridade das membranas espermáticas. Experimento 3- Efeito da congelação sobre o sêmen canino- serão realizadas 10 coletas de sêmen e estas analisadas como descrito anteriormente. O sêmen será processado e confeccionadas palhetas francesas de 0,5ml de cada grupo (TGG e GGG) segundo os melhores resultados do experimento 1, e após o período de equilíbrio (melhor resultado do experimento 2) serão levadas a um isopor contendo 5 cm de nitrogênio líquido (N2) e mantidas a 5 cm deste, durante 20 minutos, após, as palhetas serão mergulhadas no N2 e armazenadas em botijões apropriados. Palhetas de cada grupo serão posteriormente descongeladas e avaliadas quanto à motilidade e vigor espermáticos, integridade das membranas espermáticas e retenção de acrossomo, através de esfregaços corados de sêmen. Algumas serão mantidas em banho Maria a 38ºC durante 3 horas para teste de longevidade ispermática e, durante este período, avaliadas sob o mesmo critério inicial. (AU)