Purificacao e caracterizacao de peptideos antimicrobianos do carrapato de boi boophilus microplus.

• Processo: 00/03770-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de junho de 2000
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2002
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica
• Pesquisador responsável: Sirlei Daffre
• Beneficiário: Andréa Cristina Fogaça
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 98/11372-4 - Genes, proteínas e peptídeos de artrópodes de interesse médico e veterinário, AP.TEM
• Assunto(s): Artrópodes Hemoglobinas Anti-infecciosos Peptídeo hidrolases
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Antimicrobianos | Artropodes | Carapatos | Hemoglobina | Peptideos E Proteinas | Proteases

Resumo

Os peptídeos e as proteínas com atividade antimicrobiana desempenham um papel fundamental no sistema imunológico dos artrópodes. Nós detectamos uma atividade antimicrobiana na hemolinfa (plasma e hemócitos) e conteúdo intestinal dos carrapatos Boophilus microplus não infectados e iniciamos a purificação dos fatores responsáveis por essa atividade. Um peptídeo antimicrobiano do conteúdo intestinal foi purificado por HPLC e sua seqüência de aminoácidos revelou que se tratava do fragmento 33-61 da cadeia alfa da hemoglobina bovina. Não detectamos atividade dos eritrócitos bovinos lisados "in vitro", indicando que o fragmento é gerado por clivagem enzimática no intestino do carrapato. Após a incubação da hemoglobina bovina com uma enzima parcialmente purificada do conteúdo intestinal, observamos a geração de uma atividade antibacteriana. Pretendemos finalizar a purificação dessa enzima. Além disso, pretendemos purificar os peptídeos oriundos de sua ação sobre a hemoglobina, para verificarmos se um deles corresponde ao fragmento 33-61 da hemoglobina. Uma proteína antibacteriana do plasma foi purificada por HPLC. Pretendemos clonar o cDNA da mesma para obtermos a proteína recombinante, sendo possível assim determinar seu espectro de ação contra células procariontes e eucariontes. Pretendemos analisar também qual o órgão de síntese dessa proteína e o efeito de uma infecção por bactérias em seu nível de expressão. (AU)