Isolamento de mitocondrias de monocitos humanos para estudo de proteoma subcelular.

• Processo: 03/06054-3
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2004
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2006
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Química de Macromoléculas
• Pesquisador responsável: Lewis Joel Greene
• Beneficiário: Alana Maria Cerqueira de Catalán
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 98/14247-6 - Center for Research on Cell-Based Therapy, AP.CEPID
• Assunto(s): Mitocôndrias Frações subcelulares Monócitos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Fracionamento Subcelular | Mapa Bidimensionla | Mitocondrias | Monocitos | Proteoma Subcelular

Resumo

Monócitos têm sido amplamente utilizados para a obtenção in vitro de células dendríticas (DCs) que devido ao seu papel central na iniciação da imunidade inata vêm se destacando em aplicações terapêuticas principalmente na estimulação da atividade imunológica contra o câncer. A diferenciação in vitro de monócitos em DCs vem ganhando destaque devido ao custo reduzido e a maior facilidade de obtenção. Os processos de diferenciação vêm sendo estudados por metodologias comparativas, como a análise do transcriptoma e do proteoma, onde através da abordagem proteômica foram identificadas algumas proteínas diferencialmente expressas entre os monócitos e os estágios imaturo e maturo das DCs, que estão associadas à estrutura celular, metabolismo de lipídeos e quimiocinas. Entretanto, poucas proteínas mitocondriais foram detectadas por esta abordagem, apesar das mitocôndrias serem organelas citoplasmáticas essenciais de células eucarióticas que participam de um grande número de processos metabólicos como a produção de ATP, modulação do cálcio intracelular, sinalização celular, ciclo da uréia, apoptose, produção de hormônios esteróides e biossíntese do grupo Heme. Portanto, o presente projeto propõe a caracterização do proteoma subcelular de mitocôndrias de monócitos obtidos a partir de sangue periférico de doadores normais. A abordagem experimental consistirá em: (i) isolamento de monócitos a partir de sangue periférico humano; (ii) fracionamento subcelular para isolamento de mitocôndrias; (iii) Análise da homogenato da fração mitocondrial através de Western blotting ou atividade enzimática, além de utilizar paralelamente a microscopia eletrônica para caracterização do "pellet" mitocondrial; (iv) Obtenção de mapas bidimensionais e análise do perfil de proteínas. Em subseqüente projeto, serão utilizadas as mesmas metodologias para monitorar mudanças no perfil de proteínas mitocondriais em células dendríticas imaturas e maturas derivadas de monócitos. (AU)