Desenvolvimento de anticorpos monoclonais protetores contra o melanoma murino B16F10: utilização de fragmentos single-chain, (scFv) no tratamento anti-tumoral

• Processo: 03/07733-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado Direto
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2004
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2007
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Imunologia
• Pesquisador responsável: Luiz Rodolpho Raja Gabaglia Travassos
• Beneficiário: Andrey Sergee Senos Dobroff
• Instituição Sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 98/05505-1 - Resposta imune e imunoproteção contra tumores experimentais: modelo melanoma murino, AP.TEM
• Assunto(s): Anticorpos monoclonais Antineoplásicos Glicoconjugados Imunoterapia
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Anticorpos Monoclonais (Mabs) | Atividade Antitumoral | Glicoconjugados | Imunoterapia | Melanoma | Scfv (Single Chain)

Resumo

A imunização de animais singênicos (C57BI/6) com células B16F10 cultivadas in vitro na ausência de soro fetal bovino ou células crescidas in vivo, em adjuvante hidróxido de alumínio, induziu a produção de anticorpos policlonais cuja imunodominância contra epítopos de carboidratos foi demonstrada pela inibição de 90% da reação desses anticorpos em ELISA-Q pela adição de um pool de carboidratos constituído de manose, lactose, melibiose e ácido siálico. Utilizando essa mesma imunização foram obtidos 2 anticorpos monoclonais: um da classe IgG (A4) e um de classe IgM (A4M), ambos reativos com B16F10. O MoAb A4 é fortemente inibido por melibiose além de ser protetor em ensaio de neutralização, inibindo parcialmente o desenvolvimento tumoral s.c., e ligando-se a células de melanoma humano. Este projeto tem como objetivos: Determinação 1. da especificidade de ambos MoAbs, e 2. dos epítopos reativos expressos em células murinas e humanas, 3. ensaio de protocolos de proteção mais eficientes in vivo contra células murinas e humanas, associando os MoAbs a outros fatores anti-tumorais, 4. estudo do mecanismo de ação citotóxica inclusive vias de apoptose induzida pelos MoAbs em células murinas e humanas, 5. preparo de fragmentos ScFv e síntese dos CDRs variáveis derivados de ambos os MoAbs e verificação de sua atividade citotóxica in vitro e anti-tumoral in vivo, 6. ensaio de plasmídeos contendo os minigenes de ScFv e CDRs para efeito de proteção anti-tumoral. (AU)