Analise fucional e perfil proteomico. efeito de diferentes estimulos sobre a diferenciacao das celulas dendriticas plasmocitoides a partir de celulas cd34+ de sangue de cordao umbilical humano.

• Processo: 04/15624-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de janeiro de 2006
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2008
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Química de Macromoléculas
• Pesquisador responsável: Lewis Joel Greene
• Beneficiário: Ana Cristina D Avila de Castro
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Assunto(s): Imunologia
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Celulas Cd34+ | Imunologia | Perfil Proteomico | Sangue De Cordao Umbilical

Resumo

As células dendríticas plasmocitóides (PDCs) são produtoras de IFN tipo I. As PDCs originam-se de células precursoras hematopoiéticas CD34+ da medula óssea, sangue periférico, tecidos fetais, tonsilas e sangue de cordão umbilical. No presente projeto, propomos utilizar células CD34+ precursoras hematopoiéticas de sangue de cordão umbilical, estimuladas com FLT3-L e TPO que induzem expansão e diferenciação de CD34+ para PDCs imaturas. Pretendemos determinar a relação entre estimulo de maturação e propriedades específicas de PDCs maduras através do uso de diferentes estímulos de maturação, tais quais IL3, CD40L e oligonucleotideo CpG ODN (2006). Serão avaliadas propriedades das PDCs imaturas e maduras como, morfologia, imunofenotipagem, atividade endocítica, secreção de citocinas (INF tipo I, TNFα, IL-6), atividade migratória e habilidade para estimular células T. Estas células serão submetidas à análise proteômica com objetivo de identificar as proteínas diferencialmente expressas. As proteínas das PDCs, serão separadas por eletroforese bidimensional e comparadas entre si. Os "spots" que apresentarem aumento ou diminuição na expressão protéica, > 2x ou < 0,5 serão submetidos à hidrólise com tripsina e caracterizadas por espectrometria de massa tipo MALDI-TOF. Os dados serão analisados em bancos de dados específicos. O objetivo deste estudo é entender as propriedades que controlam as modificações destas células. Os dados proteômicos serão utilizados para confirmar as informações geradas ao entendimento da função do estímulo durante a diferenciação e maturação de PDCs. (AU)