Purificação da dextranasacarase de L. mesenteroides FT045B, produção de dextrana de massa molar média controlada, produção de ácido ascórbico α-glicosídeo e do composto bromo-dextrana

Autor(es)

Mary Helen Palmuti Braga Vettori

• Tipo de documento: Tese de Doutorado
• Imprenta: Rio Claro. 2016-02-05.
• Instituição: Universidade Estadual Paulista (Unesp). Instituto de Biociências. Rio Claro
• Data de defesa: 2014-11-07
• Orientador: Jonas Contiero

Resumo

O presente estudo foi desenvolvido sobre aplicações tecnológicas da dextrana produzida pela bactéria Leuconostoc mesenteroides FT045B. Para que fosse possível trabalhar com a enzima, desenvolveu-se metolodogia para purificação com polietilenoglicol (PEG), seguida de filtração em gel cromatográfico. Após análise por SDS-PAGE, foi constatado que a enzima dextranasacarase FT045B apresenta massa molar de aproximadamente 136 kDa. Resultados obtidos pela análise de variância (ANOVA) mostraram que o experimento com 10% de PEG 1500 e 20% de PEG 4000 apresentou melhor purificação da enzima dextranasacarase. Foi confirmado que a enzima dextranasacarase purificada é uma glicosiltransferase e não uma frutosiltransferase, pela análise de atividade em gel de acrilamida sob condições não denaturantes. O ácido ascórbico α-glicosídeo foi sintetizado, pela reação de transglicosilação catalisada pela dextranasacarase previamente purificada, e estruturalmente caracterizado após purificação, por espectrofotômetro de massas. Também com a dextranasacarase purificada, foi realizado um delineamento composto central para otimizar as condições de temperatura, concentração de sacarose e atividade enzimática para a produção de dextrana de massa molar controlada, sendo que o ponto ótimo obtido foi estabelecido em 4,27% de Tween 80 e 1,83g de agitação. O composto, Bromo-dextrana, foi sintetizado pela reação de acetobromação de dextrana, seguido de purificação com etanol, secagem e identificação (AU)

• Processo FAPESP: 11/00578-7 - Dextranasaracase de Leuconostoc mesenteroides FT 045B: produção de dextrana de massa molar controlada, produção de ácido ascórbico alfa-glicosídeo e do composto bromo-dextrana
• Beneficiário: Mary Helen Palmuti Braga Vettori
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado