Avaliação de suscetibilidade e estudo de gene de resistência de isolados clínicos de Candida albicans obtidos de espécimes clínicos no Hospital de Clínicas da UNICAMP

Autor(es)

Isabela Haddad Peron

• Tipo de documento: Dissertação de Mestrado
• Imprenta: Campinas, SP.
• Instituição: Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Faculdade de Ciências Médicas
• Data de defesa: 2016-03-30

Membros da banca

Angélica Zaninelli Schreiber; Wanda Pereira Almeida; Celia Regina Garlipp

• Orientador: Angélica Zaninelli Schreiber

Resumo

Leveduras do gênero Candida são integrantes da microbiota do corpo humano e, quando há um desequilíbrio entre microbiota e hospedeiro, podem se tornar patógenos oportunistas, sendo C.albicans a espécie mais frequente. A candidíase sistêmica apresenta sintomatologia infecciosa localizada que se dissemina a outros órgãos por via hematogênica. O antifúngico fluconazol inibe a síntese de ergosterol ¿ componente essencial da membrana da célula fúngica ¿ e é amplamente utilizado para profilaxia e tratamento de infecções causadas por espécies de Candida. Enquanto algumas são geneticamente resistentes (C.krusei) ou facilmente adquirem resistência (C.glabrata) a fluconazol, não há muitos relatos de resistência em C.albicans. Porém, esta levedura pode desenvolver mecanismos de resistência a fluconazol, incluindo mutações no gene ERG11, codificador da produção da enzima que atua na biossíntese do ergosterol. O presente estudo realizou a caracterização do perfil de suscetibilidade frente a antifúngicos de isolados de C.albicans obtidos de hemoculturas, bem como a investigação da ocorrência de mutações no gene ERG11 de dois isolados de C.albicans (LIF-E10 e LIF 12560) que apresentaram resistência fenotípica in vitro a fluconazol. O estudo contou com 147 isolados de C.albicans provenientes de hemoculturas realizadas no Hospital de Clínicas/UNICAMP no período de 2006 a 2010 e também com os isolados LIF-E10 e LIF 12560, que são procedentes de outros materiais clínicos (escovado esofágico e cavidade bucal, respectivamente). Os isolados estavam previamente identificados segundo metodologia micológica manual e automação (equipamento Vitek® 2 bioMérieux). Foram reativados por meio de cultura em ágar Sabouraud dextrose e posteriormente depositados em painéis para identificação no equipamento BD Phoenix®. Os testes de suscetibilidade in vitro aos antifúngicos micafungina, anfotericina B, 5-flucitosina, fluconazol, voriconazol, itraconazol e caspofungina foram realizados por microdiluição em caldo segundo os documentos M27-A3 e M27-S4 do Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). A triagem de mutações no gene ERG11 de LIF-E10 e LIF 12560 ocorreu pela amplificação de três regiões gênicas, com os iniciadores ERGSec1A/1B, ERGSec2A/2B e ERGSec3A/3B. O produto resultante foi submetido a sequenciamento e análise dos fragmentos de DNA amplificados por meio da comparação a uma cepa padrão suscetível a fluconazol (C.albicans ATCC 90028). Dos 147 isolados clínicos que passaram por reativação, 143 foram recuperados e quatro não apresentaram crescimento. Dos 143 submetidos à reidentificação no equipamento BD Phoenix®, 128 (89,5%) foram identificados como C.albicans e 15 (10,5%) foram identificados como Candida dubliniensis. Com o resultado divergente apresentado pelo BD Phoenix® em relação à identificação anterior feita pelo Vitek® 2, foi necessária a realização do sequenciamento (iniciadores ITS4/ITS5 e NL1/NL4), que resultou na confirmação dos 15 isolados como pertencentes à espécie C.albicans. Nos testes de suscetibilidade in vitro, todos os isolados de hemocultura foram caracterizados dentro da faixa suscetível (S) frente a todos os antifúngicos testados, corroborando com dados epidemiológicos mundiais que demonstram o predomínio do perfil suscetível de C.albicans. O sequenciamento do gene ERG11 dos isolados LIF-E10 e LIF 12560 revelou seis mutações (G448V e G464S para LIF-E10 e E116D, T128K, E266D e A298V para LIF 12560), todas descritas na literatura como associadas ao fenômeno de resistência de C.albicans a fluconazol (AU)

• Processo FAPESP: 14/08693-8 - Avaliação de suscetibilidade e estudo de gene de resistência de isolados de Candida albicans obtidos de espécimes clínicos no Hospital de Clínicas da UNICAMP
• Beneficiário: Isabela Haddad Peron
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado