Análise químico-farmacêutica e estudos microbiológico e de estabilidade de preparações injetáveis de daptomicina

Autor(es)

Eliane Gandolpho Tótoli Belavenuto

• Tipo de documento: Tese de Doutorado
• Imprenta: Araraquara. 2016-11-07.
• Instituição: Universidade Estadual Paulista (Unesp). Faculdade de Ciências Farmacêuticas. Araraquara
• Data de defesa: 2016-09-29
• Orientador: Hérida Regina Nunes Salgado; Sanjay Garg

Resumo

A daptomicina é o primeiro membro aprovado de uma nova classe de antimicrobianos, a dos lipopeptídeos cíclicos, e apresenta ação seletiva contra bactérias Gram-positivas, incluindo cepas resistentes à meticilina e à vancomicina. É distribuída comercialmente como Cubicin®, na forma farmacêutica de pó liofilizado para solução injetável. Por ser um medicamento de recente inserção no mercado mundial, existem poucos estudos na literatura em relação ao desenvolvimento de metodologias analíticas e estudo de estabilidade aplicados a este lipopeptídeo cíclico. Desta forma, pesquisas nesta área são de fundamental importância e altamente relevantes para otimizar sua análise na indústria e garantir a qualidade do produto já comercializado. Este trabalho desenvolveu e validou métodos analíticos para análise qualitativa e quantitativa de daptomicina em pó liofilizado, bem como estudos de estabilidade e microbiológico. Em relação à análise qualitativa, a daptomicina foi analisada quanto às suas características físicas e ponto de fusão. Também foram desenvolvidos métodos por cromatografia em camada delgada (CCD) indicativo de estabilidade, espectrofotometria na região do ultravioleta (UV), cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), eletroforese capilar (EC) e espectrofotometria na região do infravermelho (IR) médio, possibilitando a identificação da amostra. Para quantificação do fármaco, foram validados os métodos de espectrofotometria na região do UV, ensaio microbiológico pelo método turbidimétrico, CLAE, EC e espectrofotometria na região do IR médio. O método espectrofotométrico na região do UV foi desenvolvido em 221 nm, com faixa de linearidade de 6,0 a 21,0 µg/mL, utilizando água como solvente. O ensaio microbiológico pelo método turbidimétrico utilizou o micro-organismo Staphylococcus aureus ATCC 6538 IAL 2082, com faixa linear de 8,0-18,0 µg/mL. O método por CLAE utilizou comprimento de onda de detecção de 221 nm, fase móvel composta por água e etanol (45:55, v/v), com pH ajustado para 4,5 com ácido acético glacial, obtendo-se um tempo de retenção médio de 5,7 minutos e capacidade de separação de produtos de degradação. A faixa linear avaliada foi de 20 a 70 μg/mL. O método de EC foi validado em 200 nm, com eletrólito de corrida composto por solução tampão fosfato de potássio (15 mM) pH 7,0, obtendo-se um tempo de migração médio de 1,7 minutos e capacidade de separar produtos de degradação. A faixa linear foi de 50,0 a 175,0 µg/mL. A espectrofotometria na região do IR médio foi desenvolvida na faixa espectral de 1700 a 1600 cm-1. A faixa linear foi de 0,2 a 0,6 mg/150 mg. Os métodos desenvolvidos destacam-se por não utilizarem solventes orgânicos em suas análises, enquadrando-se nos parâmetros da Química Verde. Estudos de estabilidade da daptomicina também foram realizados. O produto farmacêutico apresentou boa estabilidade nas condições aceleradas (25 oC ± 2 oC/ UR 60% ± 5%) e de longa duração estudadas (5 ºC ± 3 ºC). A daptomicina na forma pura mostrou-se instável em condições alcalinas, ácidas e oxidativas. No estudo microbiológico, a daptomicina demonstrou ser muito ativa contra cepas de S. aureus resistentes à meticilina, S. pneumoniae e enterococos resistentes à vancomicina. No entanto, 15% das cepas de S. aureus sensíveis à meticilina mostraram-se resistentes. Quanto aos estudos de sinergia, combinações entre daptomicina + LP9666 e daptomicina + NCL são promissoras e merecem um estudo mais aprofundado. Os métodos desenvolvidos neste trabalho contribuem para avaliação da qualidade, segurança e eficácia terapêutica de daptomicina em pó liofilizado, além de ampliar os conhecimentos científicos relacionados a este novo antimicrobiano. (AU)

• Processo FAPESP: 13/02349-0 - Análise químico-farmacêutica e estudo de estabilidade de preparações injetáveis de daptomicina
• Beneficiário: Eliane Gandolpho Tótoli Belavenuto
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado