Expressão, purificação e caracterização da co-chaperona HOP ('Hsp70-Hsp90 Organizing Protein') de sorgo

Autor(es)

Ana Luíza Assin Squillace

• Tipo de documento: Dissertação de Mestrado
• Imprenta: Campinas, SP.
• Instituição: Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Instituto de Biologia
• Data de defesa: 2015-07-28

Membros da banca

Carlos Henrique Inacio Ramos; Melissa Regina Fessel; Carlos Francisco Sampaio Bonafé

• Orientador: Carlos Henrique Inacio Ramos

Resumo

As chaperonas moleculares representam uma classe de proteínas que atuam prevenindo a agregação e o enovelamento incorreto de proteínas. Em plantas, as chaperonas moleculares possuem suma importância pois desempenham funções ligadas à proteção contra diversos tipos de estresses ambientais e, uma vez que são organismos sésseis, as plantas devem ser capazes de responder de forma eficiente à mudanças na temperatura, salinidade, déficit hídrico, entre outros. A chaperona Hsp90 é essencial para a fisiologia celular, pois está envolvida na estabilização de diversas proteínas envolvidas em sinalização. Sua interação com co-chaperonas, proteínas auxiliares das chaperonas, permite que a Hsp90 atue como uma proteína `hub¿, ou seja, um ponto central de regulação de diversas proteínas e de diversas vias de regulação. A intervenção na interação da Hsp90 com co-chaperonas é, portanto, uma estratégia potencialmente efetiva para intervir na função desta chaperona. Uma de suas co-chaperonas é a Hop, que está presente em diversos organismos, é capaz de se associar diretamente as chaperonas, Hsp70 e Hsp90, e também mediar a associação entre elas, e que é dependente da hidrólise de ATP e troca ADP/ATP. A Hop é composta por três domínios com repetições de tetratricopeptídeos (TPR), relacionados à interação com as chaperonas, entretanto, como esse mecanismo ocorre nos seres-vivos ainda não é bem conhecido e divergências acerca de seu estado oligomérico ainda são encontradas na literatura. Nesse trabalho foram realizados estudos de expressão de da Hop de sorgo (SbHop) em Escherichia coli e caracterização utilizando técnicas biofísicas. A proteína foi produzida pura e os resultados de dicroísmo circular (CD) indicaram que a proteína estava enovelada e com estrutura predominante de hélice ?, já os experimentos de desenovelamento térmico monitorado por CD e por fluorescência extrínseca mostraram que a proteína se mantém estável pelo menos até 40°C. Ademais estudos envolvendo gel filtração e espalhamento de luz mostraram que SbHop se comporta como um monômero. A realização desse estudo se faz extremamente relevante uma vez que o conhecimento sobre os mecanismos de resposta e tolerância a estresses abióticos em plantas ainda é limitado (AU)

• Processo FAPESP: 11/16047-0 - Estudo da interação entre Hsp90 e co-chaperonas com domínio TPR.
• Beneficiário: Ana Luíza Assin Squillace
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado