Estudo da imobilização de antígenos de Leishmania infantum sobre plataformas organizadas empregando SPR e QCM para detecção de anticorpos específicos da Leishmaniose Visceral

Autor(es)

Dênio Emanuel Pires Souto

• Tipo de documento: Tese de Doutorado
• Imprenta: Campinas, SP.
• Instituição: Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Instituto de Química
• Data de defesa: 2016-05-20

Membros da banca

Lauro Tatsuo Kubota; João Marcos Madurro; Mauricio da Silva Baptista; Ljubica Tasic; Dosil Pereira de Jesus

• Orientador: Lauro Tatsuo Kubota

Resumo

A leishmaniose é referida pela organização mundial da saúde como uma das principais doenças parasitárias, acometendo cerca de 2 milhões de pessoas anualmente em 98 países diferentes. A leishmaniose visceral (LV) é a forma mais grave e devido às limitações dos ensaios convencionais (ELISA, por exemplo) utilizados para seu diagnóstico, grandes motivações estão voltadas ao desenvolvimento de novas metodologias para detecção dessa parasitose. No presente trabalho, as técnicas de ressonância de plásmons de superfície (SPR) e microbalança de cristal de quartzo (QCM) foram utilizadas no desenvolvimento de imunossensores para detecção de anticorpos específicos da LV. Em relação à etapa de funcionalização de superfícies metálicas durante a construção dos biossensores, maior eficiência foi observada através de plataformas multivalentes formadas por dendrímeros ou dendrons combinados ou não a monocamadas auto-organizadas (SAMs) de alcanotióis. Nesta etapa, destaca-se a síntese orgânica de um dendron inédito do tipo HS-dendron-(PEG-COOH)9. Em relação à caracterização dos biossensores, enfatiza-se uma abordagem particularmente adotada pelo nosso grupo, através da qual foi possível mediante curvas de refletância de SPR obtidas em diferentes comprimentos de onda (670 e 785 nm) determinar simultaneamente a espessura (4,64 nm) e o índice de refração (1,475) de uma proteína recombinante quimérica imobilizada sobre o substrato sensor. Através de estudos cinéticos, foi possível mensurar o potencial antigênico de novas proteínas de L. infantum, verificando elevada afinidade de ligação de duas proteínas (KD = 8,27 x 10-10 mol L-1 para a proteína quimérica recombinante (CP10); e KD1 x KD2 = 1,64x10-7 mol L-1 para a proteína recombinante hipotética C1) frente a anticorpos específicos da LV. Tais resultados, somados à capacidade de detecção de casos assintomáticos (> 80%) observados nos ensaios de ELISA, evidenciaram a viabilidade de aplicação dessas proteínas no imunodiagnóstico da LV. Análises com amostras reais (soros caninos) apontaram vantagens dos biossensores de SPR e QCM em relação aos testes convencionais, tais como, maior sensibilidade, especificidade, rapidez e a não necessidade de marcação. Portanto, os resultados obtidos neste trabalho de tese são substanciais para contribuição significativa no diagnóstico e programas de controle da LV (AU)

• Processo FAPESP: 12/24493-3 - Estudo da imobilização de antígenos de Leishmania infantum sobre plataformas organizadas empregando Ressonância de Plásmons de Superfície e Microbalança de Cristal de Quartzo para detecção a anticorpos específicos de Leishmaniose Visceral
• Beneficiário: Dênio Emanuel Pires Souto
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado