Investigação da patobiologia do LPS nas infecções endodônticas e sua susceptibilidade a diferentes modalidades terapêuticas

Autor(es)

Ariane Cassia Salustiano Marinho

• Tipo de documento: Tese de Doutorado
• Imprenta: Piracicaba, SP.
• Instituição: Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Faculdade de Odontologia de Piracicaba
• Data de defesa: 2016-11-18

Membros da banca

Brenda Paula Figueiredo de Almeida Gomes; Daniel Pinto de Oliveira; Fábio Renato Manzolli Leite; Frederico Canato Martinho; Rogerio de Castilho Jacinto

• Orientador: Brenda Paula Figueiredo de Almeida Gomes

Resumo

Estratégias clínicas devem voltar-se para a máxima desagregação/redução da carga microbiana, assim como para eliminação e/ou inativação de lipopolissacarídeos (LPS) e demais produtos tóxicos e assim, reduzir o potencial inflamatório do conteúdo endodôntico aos tecidos periapicais. Os objetivos do presente estudo foram: 1) Avaliar a efetividade do sistema Reciproc (R25) em comparação com diferentes sistemas rotatórios na remoção de bactérias e endotoxinas de canais radiculares contaminados (artigo 1); Investigar a influência da interação entre substâncias antimicrobianas utilizadas na terapia endodôntica e o substrato Limulus Amebocyte Lysate (LAL) para quantificação de endotoxinas, com o objetivo de identificar substâncias interferentes quando da leitura dos níveis de endotoxinas em amostras clínicas (artigo 2); Monitorar "in vivo" a efetividade do preparo químico-mecânico (PQM) com NaOCl 2,5% e Clorexidina (CHX) gel 2% (tendo como controle o soro fisiológico [SS]) após o uso do EDTA 17% e medicação intracanal na redução de LPS, elucidando a contribuição de cada etapa da terapia endodôntica na redução de endotoxinas (artigo 3); Estudar o perfil da microbiota e níveis de endotoxinas nas infecções endodônticas primárias com lesão periapical, determinando o potencial inflamatório do conteúdo endodôntico contra macrófagos através da produção de IL1- ß e TNF-?. Além disso, comparar "in vivo" a efetividade do preparo químico-mecânico (PQM) com NaOCl 2,5% e Clorexidina (CHX) gel 2% e após o uso do EDTA 17% e medicação intracanal na eliminação de LPS, tendo como controle, soro fisiológico (SS) (artigo 4); Investigar a influência de diferentes substâncias químicas auxiliares utilizadas no tratamento endodôntico e da medicação à base de hidróxido de cálcio por diferentes períodos na estrutura e bioatividade do lipopolissacarídeo bacteriano, visando elucidar a ocorrência de possíveis implicações na detecção do lipideo A/ LPS e posteriormente, seu potencial imunoestimulador em receptores TLR-4 (artigo 5). Métodos: Amostras foram coletadas de canais radiculares utilizando cones de papel estéreis/despirogenizados. PCR (16s rDNA), contagem de unidades formadoras de colônias e método LAL foram utilizados. Macrófagos Raw 264.7 foram estimulados com conteúdo endodôntico infeccioso e determinação dos níveis de IL1- ß e TNF-? foi realizada por meio de ELISA. Espectrometria de massa (MALDI-TOF) e silver staining determinaram a presença de picos de lipídeo A e bandas correspondentes à presença de LPS após tratamentos, respectivamente. Em paralelo, ativação de TLR-4 foi realizada para determinação do potencial imunoestimulador do LPS. Resultados: Artigo 1- Não houve diferença entre o sistema Reciproc R25 e os diferentes sistemas rotatórios na remoção de bactérias e endotoxinas de canais radiculares contaminados, respectivamente: Reciproc (99.34% e 91.69%); GII - Mtwo (99.86% e 83.11%); GIII- ProTaper (99.93% e 78.56%); and GIV- FKG RaceTM (99.99% e 82.52%). Artigo 2- Água oxigenada 30%, Otosporin® e pasta tripla antibiótica causaram inibição/superestimação dos níveis de endotoxina em todas as diluições testadas. Artigo 3- PQM foi capaz de reduzir significativamente os níveis de LPS: NaOCl 2.5% (99.65%) (GI), CHX 2% (94.27%) (GII), e SS (96.79%) (GIII) (p<.05). Medicação intracanal por 30 dias contribuiu para potencializar a redução de endotoxinas: NaOCl 2.5% (90%) (GI), CHX 2% (88.8%) (GII) e SS (85.7%) (GIII, p<.05). Artigo 4- Porphyromonas gingivalis (17/30), Porphyromonas endodontalis (15/30) e Prevotella nigrescens (11/30) foram as espécies bacterianas mais prevalentes em infecções endodônticas primárias. Endotoxinas foram detectadas em 100% dos canais radiculares. O PQM foi capaz de reduzir significativamente os níveis de LPS (p<0.05). NaOCl 2,5% associado à instrumentação rotatória Mtwo® obteve menores níveis de LPS residuais (NaOCl 2,5%= 0,09 EU/mL; CHX 2%= 0,81 EU/mL; SS= 4,81 EU/mL). Após uso do EDTA 17% e do hidróxido de cálcio não foram encontradas diferenças estatísticas entre NaOCl 2,5% e CHX gel 2%. IL-1? and TNF-? foram produzidos por macrófagos estimulados com conteúdo endodôntico inicial, decrescendo seus níveis proporcionalmente após a incorporação do procedimento intracanal subsequente (p<0.05). Artigo 5- NaOCl 5,25% e Ca(OH)2 após 24h induziram a perda de detecção de lipideo A e de LPS, enquanto que nenhuma alteração estrutural foi observada após espectrometria de massa do lipídeo A e silver staining do LPS tratado com as demais substâncias químicas auxiliares. Quanto à ativação de TLR-4, LPSs tratados por NaOCl 5,25% e Ca(OH)2 foram significativamente menos potentes em ativar TLR-4 quando comparado com as demais substâncias testadas. Foi possível concluir que: (R25) foi tão efetivo quanto os sistemas rotatórios de múltiplas limas na remoção de bactérias e endotoxinas de canais radiculares contaminados (artigo 1); Características de desempenho - precisão e reprodutibilidade- do teste cinético turbidimétrico para quantificação de endotoxinas são influenciadas pela interação do substrato LAL com água oxigenada 30%, Otosporin® e pasta tripla antibiótica (artigo 2); Elevada redução de endotoxinas ocorre após o preparo químico-mecânico e após uso da medicação intracanal (artigo 3). Procedimentos adicionais após o PQM potencializam a redução de endotoxinas. Consequentemente, há progressiva redução do potencial inflamatório do conteúdo endodôntico quanto à produção de IL1- ? e TNF-? (artigo 4); NaOCl 5,25% e pasta de hidróxido de cálcio são capazes de induzir perda de detecção do lipideo A/LPS, comprometendo sua integridade estrutural e, portanto, neutralizando seu potencial imunoestimulador em receptores TLR-4 (artigo 5) (AU)

• Processo FAPESP: 13/02402-9 - Investigação do conteúdo microbiológico e de endotoxinas e sua atividade antigênica em canais radiculares de dentes com pulpite irreversível e necrose pulpar na produção de citocinas pró-inflamatórias
• Beneficiário: Ariane Cássia Salustiano Marinho
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado