Prospecção de enzimas no fungo Purpureocillium lilacinum utilizando as técnicas de proteoma: produção recombinante de enzimas com potencial biotecnológico e avaliação de antifúngicos

Autor(es)

Rafael Pedezzi

• Tipo de documento: Tese de Doutorado
• Imprenta: Ribeirão Preto.
• Instituição: Universidade de São Paulo (USP). Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto (PCARP/BC)
• Data de defesa: 2019-08-09

Membros da banca

Hamilton Cabral; Eleni Gomes; Arthur Henrique Cavalcante de Oliveira; Maria de Lourdes Teixeira de Moraes Polizeli

• Orientador: Hamilton Cabral

Resumo

O fungo ascomiceto Purpureocillium lilacinum pode ser encontrado em solo, vegetação em decomposição, insetos, nematoides e outros locais. Apresenta grande importância agrícola, visto que pode ser utilizado como controle biológico por ser capaz de infectar e matar nematoides pragas de culturas, graças às suas enzimas, como peptidases e quitinases. Além disso, o fungo apresenta importância médica, pois é capaz de gerar infecção em humanos. A terapêutica das doenças infecciosas causadas por P. lilacinum é dificultada pelo fato de ele apresentar resistência a antifúngicos \"azólicos\", principais moléculas aplicadas na clínica médica atualmente. O presente trabalho teve como objetivo explorar molecularmente o fungo P. lilacinum com relação à sua capacidade de resistir a antifúngicos e à sua capacidade de produzir peptidases robustas, com potencial de aplicação biotecnológica. Ferramentas moleculares como transcriptômica e proteômica foram aplicadas para acessar os dados moleculares do fungo e viabilizar análises de expressão diferencial para verificar as respostas aos antifúngicos fluconazol e itraconazol e anotação gênica para prospecção de peptidases. Foi observado que P. lilacinum promove um aumento de expressão dos genes alvo dos antifúngicos e dos genes que codificam bombas de efluxo. Com esse mecanismo, não há acúmulo de antifúngico intracelular e há compensação numérica da enzima que está sendo inibida pelo antifúngico com mais expressão da mesma. Dessa forma, o fungo consegue manter a síntese de ergosterol normalizada. As enzimas prospectadas e expressas de maneira recombinante em Pichia pastoris foram uma serino peptidase (rPl_SerPep) e uma metalo peptidase (rPl_MetPep). A rPl_SerPep se mostrou alcalina, com temperatura ótima aparente de 60 °C e termoestável. Já a rPl_MetPep se mostrou ativa em pH neutro e com temperatura ótima aparente de 40 °C. Essas enzimas se mostraram promissoras para futuros testes de aplicação biotecnológica. (AU)

• Processo FAPESP: 15/16084-4 - Prospecção de enzimas no fungo Skopulariopsis koningii, utilizando a técnica de proteoma: Produção Recombinante de Enzimas com Potencial Biotecnológico e Avaliação de Antifúngicos
• Beneficiário: Rafael Pedezzi
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado