Avaliação in vitro da laserterapia de baixa intensidade sobre cultura de osteoblastos, fibroblastos e queratinócitos submetidos à terapia com ácido zoledrônico

Autor(es)

Fernanda Gonçalves Basso

• Tipo de documento: Tese de Doutorado
• Imprenta: Piracicaba, SP.
• Instituição: Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Faculdade de Odontologia de Piracicaba
• Data de defesa: 2013-05-27

Membros da banca

Carlos Alberto de Souza Costa; Luis Carlos Spolidorio; Élcio Marcantonio Junior; Maria Elvira Pizzigatti Corrêa; Ricardo Della Coletta

• Orientador: Carlos Alberto de Souza Costa

Resumo

Estudos recentes têm demonstrado que a etiopatogenia da osteonecrose induzida por bisfosfonatos parece estar associada, pelo menos em parte, à citotoxicidade destes medicamentos às células ósseas e dos tecidos adjacentes. O tratamento da osteonecrose com antibióticos sistêmicos e tópicos, bem como com o tratamento cirúrgico, têm sido os mais indicados, sendo que alguns trabalhos clínicos apresentaram a laserterapia de baixa intensidade (LBI) como tratamento coadjuvante para esta alteração. Porém, os efeitos da LBI sobre as células envolvidas na etiopatogenia da osteonecrose ainda não foram demonstrados. Portanto, este estudo teve como objetivo avaliar o efeito in vitro de um bisfosfonato nitrogenado de alta potência - Ácido Zoledrônico (AZ) - sobre células dos tecidos ósseo, conjuntivo e epitelial, e avaliar o efeito da LBI sobre estas células pré-expostas ao AZ. Foram utilizadas três linhagens celulares humanas: células epiteliais (HaCaT), fibroblastos de gengiva (HGF) e osteoblastos (SaOs-2). As células foram cultivadas em meio de cultura (DMEM) contendo 10% de soro fetal bovino (SFB), por 48 horas. A seguir, este DMEM foi substituído por meio sem SFB por 24 horas, seguido da aplicação de AZ, na concentração de 5 ?M, por 48 horas. Após este período, o DMEM contendo AZ foi aspirado e um novo meio de cultura completo (10% SFB) foi adicionado. As células foram então submetidas à irradiação com LBI, utilizando o protótipo LaserTABLE (InGaAsP - 780 nm +-3 nm, 25 mW), nas doses de 0,5; 1,5; 3; 5 e 7 J/cm2. Foram realizadas 3 irradiações a cada 24 horas. Decorrido 24 horas da última irradiação, procedeu-se a avaliação da viabilidade celular, produção de proteína total, atividade de fosfatase alcalina, formação de nódulos de mineralização, expressão gênica de colágeno tipo I (Col-I), fator de crescimento fibroblástico tipo 2 (FGF2), fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) e fosfatase alcalina (ALP), além da análise da morfologia celular em MEV. Os dados foram submetidos à avaliação de normalidade, e analisados estatisticamente, utilizando os testes de Kruskal-Wallis e Mann-Whitney, considerando o nível de significância de 5%. O AZ causou redução significativa da viabilidade celular, produção de proteína total e expressão de Col-I e VEGF para todas as linhagens celulares avaliadas (p<0,05), assim como alterações morfológicas significativas. A expressão e atividade de ALP e a formação de nódulos de mineralização pelos osteoblastos também foi negativamente afetada (p<0,05). A LBI produziu efeitos diversos, de acordo com cada linhagem celular. Considerando as linhagens celulares isoladamente, as melhores doses foram de 5 e 7 J/cm2; 3 J/cm2, e 0,5 J/cm2, para as células epiteliais, fibroblastos e osteoblastos, respectivamente. Associada ao AZ, para as células epiteliais, a dose de 5 J/cm2 promoveu os melhores efeitos, enquanto para os fibroblastos de gengiva e osteoblastos, as melhores doses foram de 3 J/cm2 e 0,5 J/cm2, respectivamente. Estes resultados demonstram que a LBI pode promover estimulação das células da mucosa oral e tecido ósseo tratadas com AZ, assim como das células presentes em áreas adjacentes, o que poderia promover um aumento da capacidade de reparo destes tecidos (AU)

• Processo FAPESP: 09/52326-1 - Avaliação in vitro dos efeitos da laserterapia de baixa intensidade sobre cultura de osteoblastos, fibroblastos e queratinócitos submetidos ao tratamento com ácido zoledrônico
• Beneficiário: Fernanda Gonçalves Basso
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado