Avaliação da eficácia da DNase associada a terapia fotodinâmica na inativação de biofilmes de isolados clínicos de Candida albicans resistente a fluconazol

Autor(es)

César Augusto Abreu Pereira

• Tipo de documento: Dissertação de Mestrado
• Imprenta: Araraquara. 2021-08-02.
• Instituição: Universidade Estadual Paulista (Unesp). Faculdade de Odontologia. Araraquara
• Data de defesa: 2021-06-30
• Orientador: Ana Claudia Pavarina; Marlise Inêz Klein Furlan

Resumo

A terapia fotodinâmica antimicrobiana (TFD) promove a inativação dos microrganismos em cultura planctônica, entretanto, biofilmes são menos sensíveis à essa terapia. A resistência dos biofilmes de Candida spp. é multifatorial e está associada ao efeito protetor da matriz extracelular do biofilme (MEC) que impede a penetração do agente fotossensibilizador (FS) e de fármacos. O objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia da enzima DNase I associada à TFD, mediada por Photodithazine® (200 mg/L) e Luz LED (660 nm; 50 J/cm2), sobre biofilmes de isolados clínicos de C. albicans resistentes ao fluconazol (CaR). Biofilmes de 48 horas foram formados a partir das cepas de CaR [ATCC 96901; e dois isolados clínicos (R14 e R70)]. A DNase foi utilizada com objetivo de degradar a MEC dos biofilmes e potencializar o efeito da TFD. Os biofilmes foram expostos a pré-incubação com DNase por 5 min, seguida da aplicação do fotossensibilizador (P) e da Luz (L), de forma isolada ou em associação, originando 8 grupos de tratamento (P+L+, P-L+, P+L-, P-L-, P-L-DNase, P+L+DNase, P+L-DNase e P-L+DNase; n=12). A eficácia dos tratamentos foi avaliada através dos seguintes métodos: contagem de unidades formadoras de colônias (UFC), quantificação de: peso seco total e insolúvel, proteínas solúveis e insolúveis, polissacarídeos solúveis em água (WSP) e em álcali (ASP), e DNA extracelular (eDNA). Os dados foram submetidos ao teste ANOVA three-way com pós teste de Bonferroni. O tratamento com DNase em associação à TFD (P+L+DNase) apresentou redução de 1.92; 1.65 e 1.29 em log10 da viabilidade celular para as cepas ATCC 96901, R14 e R70, respectivamente. Também foi observado redução dos componentes da MEC dos biofilmes, como WSP e eDNA, bem como sua biomassa insolúvel quando comparados com o grupo controle (P-L-). O peso seco total e a quantificação de proteínas não apresentaram diferença estatística entre os tratamentos. Todas as cepas apresentaram o mesmo padrão de comportamento quando tratadas com DNase, e os componentes da MEC foram afetados, potencializando a eficácia da TFD. (AU)

• Processo FAPESP: 19/11602-8 - Avaliação da eficácia da DNase associada à terapia fotodinâmica na inativação de biofilmes de isolados clínicos de Candida albicans resistente a fluconazol
• Beneficiário: César Augusto Abreu Pereira
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado