Desenvolvimento do processo de purificação da proteína A de superfície de pneumococo do clado 4 (PspA4Pro).

Autor(es)

Douglas Borges de Figueiredo

• Tipo de documento: Dissertação de Mestrado
• Imprenta: São Paulo.
• Instituição: Universidade de São Paulo (USP). Instituto de Ciências Biomédicas (ICB/SDI)
• Data de defesa: 2014-09-23

Membros da banca

Viviane Maimoni Gonçalves; Adriano Rodrigues Azzoni; Giovana Cappio Barazzone

• Orientador: Viviane Maimoni Gonçalves; Joaquín Cabrera Crespo

Resumo

A proteína A de superfície de pneumococo (PspA) é encontrada na superfície de todas as cepas de Streptococcus pneumoniae e candidata promissora para novas vacinas pneumocócicas. Foi desenvolvido um processo de purificação da PspA4Pro cujas etapas iniciais foram: ruptura da biomassa celular, precipitação do homogenato obtido com o detergente brometo de cetiltrimetilamônio (CTAB) e remoção do precipitado por centrifugação. Foram avaliadas cromatografias de troca iônica (aniônica, catiônica), afinidade por metais, interação hidrofóbica e mista de troca catiônica e hidrofóbica. Utilizando precipitação com CTAB, cromatografia de troca aniônica, crioprecipitação em pH4,0 e cromatografia de troca catiônica atingiu-se a pureza requerida de PspA4Pro (>95%) com recuperação entre 14% e 33%. O processo alcançou níveis aceitáveis de endotoxina no produto final e a PspA4Pro purificada foi reconhecida por anticorpos anti-PspA4, manteve sua atividade e sua estrutura secundária. (AU)

• Processo FAPESP: 12/04858-7 - Desenvolvimento do processo de purificação da proteína a de superfície do pneumococo do clado 4 (PspA4Pro)
• Beneficiário: Douglas Borges de Figueiredo
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado