Análise proteômica da película adquirida do esmalte e saliva em pacientes com câncer de cabeça e pescoço submetidos à radioterapia

Autor(es)

Talita Mendes Oliveira Ventura

• Tipo de documento: Tese de Doutorado
• Imprenta: Bauru.
• Instituição: Universidade de São Paulo (USP). Faculdade de Odontologia de Bauru (FOB/SDB)
• Data de defesa: 2021-05-21

Membros da banca

Marilia Afonso Rabelo Buzalaf; Vanessa Soares Lara; Anuradha Prakki; Jonas de Almeida Rodrigues

• Orientador: Marilia Afonso Rabelo Buzalaf; Paulo Sergio da Silva Santos

Resumo

As glândulas salivares são afetadas durante a radioterapia na região da cabeça e pescoço, levando à redução do fluxo salivar e alterando a composição da saliva. Nesta tese, composta de 6 artigos, avaliamos as alterações no perfil proteômico da película adquirida do esmalte (PAE) e da saliva em pacientes com câncer de cabeça e pescoço (CCP) submetidos à radioterapia, para procurar estratégias terapêuticas e biomarcadores prognósticos. Nos primeiros 2 artigos, os protocolos para padronização da análise proteômica da saliva e coleta da PAE são descritos. Nos artigos 3, 4 e 5, pacientes com CCP tiveram suas PAEs e salivas coletados antes (BRT), durante (2-5 semanas; DRT) e após (3-4 meses; ART) radioterapia. As salivas e PAEs também foram coletadas de pacientes saudáveis (controle; C). As proteínas foram extraídas e processadas para proteômica. Os fluxos salivares também foram avaliados. No total, 1.055 proteínas foram identificadas na saliva não-estimulada, sendo 47 comuns a todos os grupos, enquanto 86, 86, 286 e 395 foram encontradas exclusivamente C, BRT, DRT e ART, respectivamente. Notavelmente, alfa-enolase foi aumentada 35X DRT em comparação com BRT, enquanto proteínas ricas em prolina (PRPs) diminuíram. ART houve aumento de 16X da scaffold attachment factor-B1 e diminuição de 3X da alfa-enolase e cistatinas. Em comparação ao C, nos pacientes BRT houve aumento de cistatina-C, lisozima C, histatina-1 e PRPs na saliva (artigo 3). Diferenças significativas foram observadas entre fluxos salivares estimulados e não-estimulados para C e BRT (p>0,001), mas não para DRT e ART. Proteínas envolvidas com apoptose e resistência antibacteriana foram diminuídas na saliva estimulada comparada com a não-estimulada DRT e ART (artigo 4). Na PAE, Statherin aumentou mais de 9X e hemoglobinas aumentaram mais de 5X DRT comparado com BRT, enquanto lactotransferrina, proteínas ricas em prolina, cistatinas, neutrófilo-defensinas e histatina-1 diminuíram. ART, lactotransferrina e histonas aumentaram, porém Statherin e alfa-amilases diminuíram. MOAP-1 foi encontrada exclusivamente ART comparada com BRT. Quando comparado ao Controle, PAE dos pacientes BRT apresentou aumento das proteínas relacionadas à percepção do sabor amargo, mucina-7 e alfa-amilases, enquanto cistatina-S diminuiu (artigo 5). No artigo 6, avaliou-se o efeito protetor da PAE formada in vitro no esmalte por diferentes tempos, bem como sua engenharia com peptídeo da estaterina (StatpSpS), contra erosão inicial. A PAE protegeu quase instantaneamente esmalte natural contra a erosão, mesmo com tempos de formação tão curtos quanto 1 min. Tempos de formação mais longos não aumentaram a proteção. O StatpSpS sozinho conferiu proteção similar àquela da PAE. Em conclusão, tanto o CCP quanto a radioterapia alteram profundamente o proteoma da saliva e da PAE. O fluxo salivar não-estimulado é a melhor alternativa na busca por biomarcadores. Monitorar níveis de alfa-enolase na saliva não-estimulada DRT e MOAP-1 na PAE ART podem ser estratégias possíveis para predizer a eficácia da radioterapia. Nossos resultados fornecem importantes informações para o desenvolvimento de produtos odontológicos mais eficazes para estes pacientes e contribuem para um melhor entendimento do papel protetor da PAE e das alterações progressivas que ocorrem nas proteínas salivares em consequência da radioterapia. (AU)

• Processo FAPESP: 17/05031-2 - Análise proteômica da película adquirida do esmalte e saliva em pacientes com câncer de cabeça e pescoço submetidos à radioterapia
• Beneficiário: Talita Mendes Oliveira Ventura
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado