Vesículas extracelulares pequenas como marcador preditivo em cães com linfoma multicêntrico

Autor(es)

Taismara Kustro Garnica

• Tipo de documento: Dissertação de Mestrado
• Imprenta: Pirassununga.
• Instituição: Universidade de São Paulo (USP). Faculdade de Zootecnica e Engenharia de Alimentos (FZE/BT)
• Data de defesa: 2020-05-28

Membros da banca

Heidge Fukumasu; Andrigo Barboza de Nardi; Tiago Góss dos Santos

• Orientador: Heidge Fukumasu; Juliano Coelho da Silveira

Resumo

O linfoma é o tipo mais comum de malignidade hematológica canina, onde a forma multicêntrica é responsável por 75% de todos os casos. O tratamento padrão é o protocolo CHOP de 19 semanas, no qual 85% dos cães alcançam resposta completa / parcial; porém uma grande parcela recidiva a doença em um período de até um ano após o diagnóstico. A avaliação da resposta terapêutica e a compreensão dos mecanismos envolvidos no processo quimioresistência tem sido os maiores desafios do linfoma canino. Diante disso, esse trabalho foi dividido em dois estudos principais: No primeiro estudo investigamos in vivo o potencial de exossomos séricos e seus miRNAs como marcadores preditivos para o linfoma canino. No segundo estudo investigamos in vitro o papel dos exossomos derivados de células quimioresistentes em linhagens humana e canina de neoplasias hematopoiéticas. Para o primeiro estudo foram utilizados vinte e dois cães (8 em Remissão Completa e 14 em Progressão da Doença). Os exossomos isolados dos cães foram avaliados quanto ao tamanho e concentração e foi realizada uma triagem de 95 oncomir em amostras selecionadas de pacientes com RC e DP. Os pacientes com DP apresentaram maior concentração de exossomos séricos no momento do diagnóstico do que os pacientes com RC (D0, P = 0,0277). A análise da curva ROC foi significativa para a concentração de exossomos para predizer a resposta ao CHOP (AUC = 0,8076, P = 0,0203) e sobrevida global (AUC = 0,8333, P = 0,0136). O miR-205 (P = 0,0384) e o miR-222 (P = 0,0578) apresentaram maior frequência no grupo RC e o mir-20a foi mais expresso em pacientes com RC (P = 0,085), enquanto o miR-93 foi mais expresso em pacientes com DP (P = 0,09). No segundo estudo induzimos a quimioresistência utilizando o protocolo CHOP nas células 3132 (linfoma canino de células B) e células Jurkat (leucemia de células T humana). Mostramos que as células resistentes 3132-CR e Jurkat-CR têm um tempo de duplicação mais lento em comparação com suas células ingênuas respectivas. As células 3132 e 3132-CR secretaram uma maior quantidade de exossomos após o tratamento quimioterápico (P = 0,0187), porém não houve diferença na quantidade de exossomos entre as linhagens (P = 0,7661). Houve um aumento na proliferação de células após o tratamento do exossomos em comparação ao controle para 3132 (P <0,001) e Jurkat (P <0,0035). No entanto, não houve diferença na proliferação comparando o tratamento usando exossomos derivados de células nativas e aqueles derivados de células CR para 3132 (P = 0,11) e Jurkat (P = 0,91). A proliferação celular foi maior após 78 horas de tratamento com exossomos para 3132 (P <0,001) e Jurkat (P <0,001). Em conclusão, os resultados gerados por esses estudos podem desencadear avanços na oncologia veterinária pela introdução da abordagem de biópsia líquida e pela compreensão de mecanismos de desenvolvimento de quimioresistência mediados por exossomos. (AU)

• Processo FAPESP: 17/15406-3 - Vesículas extracelulares como potencial marcador preditivo em cães com linfoma multicêntrico
• Beneficiário: Taismara Kustro Garnica
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado