Isolamento e caraterização genotipica e fenotipica de amostras de Escherichia coli isoladas de bezerros no estado de São Paulo, Brasil

Autor(es)

Leila Aidar Ugrinovich

• Tipo de documento: Tese de Doutorado
• Imprenta: Campinas, SP.
• Instituição: Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Instituto de Biologia
• Data de defesa: 2004-00-00

Membros da banca

Antonio Fernando Pestana de Castro; Marcelo Brocchi; João Ramos Costa Andrade; Wanderley Dias da Silveira; Tania Aparecida Tardelli Gomes do Amaral

• Orientador: Antonio Fernando Pestana de Castro; Jorge Blanco Alvarez

Resumo

Foram isoladas 98 amostras de Escherichia coli, portadoras dos genes eae, stx, ou ambos, entre 264 bezerros diarréicos e 282 bezerros sadios, com idade entre 4 a 5 meses. Uma vez positivas em PCR para 1 ou ambos os genes, as amostras foram estudadas quanto presença de genes que codificam para enterotoxinas e citotoxinas: Termo lábil I (LT-I), Termo lábil li (LT-lI), Termo estável a (Sta), Termo estável b (STh), Fator necrotizante citotóxico 1 (CNF1), Fator necrotizante citotóxico 2 (CNF2), EaggEC heat-stable toxin 1 (EAST1) e Enterohemolisina (Eh1y), sendo que Eh1y foi testado também quanto a sua expressão, em ágar sangue. Entre os animais diarréicos, obtivemos 27 animais (10,2%) stx positivos e 15 animais (5,68%) eae positivos e entre os animais sadios, obtivemos 22 (7,8%) stx positivos e 17 (6,03%) eae positivos. Genes para CNF foram encontrados entre 5 (1,9%) animais diarréicos e 4 (1,4%) animais não diarréicos. LT-lI foi encontrada em uma única amostra isolada de um animal diarréico. Ehly foi encontrada em 20 (7,6%) animais diarréicos e 22 (7,8%) animais sadios. O gene ast1 foi encontrado em apenas 2 animais, sendo um diarréico e um sadio. Dos genes que codificam para as adesinas pesquisadas (BFP e Saa), somente saa foi encontrado (22mnostras),sendo-queoplasmídio EAF não esteve presente. As amostras eae+ foram pesquisadas através de PCR quanto ao subtipo de intimina apresentado, sendo que 17 amostras foram positivas para o subtipo 131, 15 amostras foram positivas para o subtipo y2, 3 amostras foram positivas para E, 2 amostras apresentaram-se ç+ e 1 amostra apresentou-se µ1+. As 10 amostras restantes apresentaram intimina Não Tipável. Também testamos estas amostras quanto à produção da lesão AlE, através do teste de F AS, sendo que 33 amostras apresentaram-se positivas neste teste, 10 apresentaram-se negativas e 5 não puderam ser testadas, pois não aderiram à linha celular HEp-2. Quando testamos estas amostras eae+ quanto à inserção de LEE, a grande maioria (37 amostras) apresentou pheU interrompido, indicando uma provável presença de LEE inserido neste locus. Todas as amostras foram testadas quanto à aderência em células HEp-2. Dez amostras apresentaram aderência Difusa (10,20%), 14 apresentaram aderência Agregativa (14,3%), 17 apresentaram aderência Localizada-like (17,3%), 26 apresentaram aderência Não Característica (26,5%) e 25 (25,5%) foram negativas para este teste. Uma amostra demonstrou aderência do tipo Cover Slip (1%) e 5 amostras provocaram descolamento do tapete celular (5%). O teste de Separação Imuno-Magnética (SIM) não favoreceu o isolamento de nenhuma amostra de E. coZi do sorogrupo 0157 entre as 50 amostras de carne bovina crua e 50 amostras fecais testadas (AU)

• Processo FAPESP: 00/04975-6 - Características das Escherichia coli produtoras de Shiga-toxins (STEC) e correlação com a presença do gene EAE, em amostras isoladas de bezerros no Brasil
• Beneficiário: Leila Aidar Ugrinovich
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado