Microcristais de tungstato de prata, molibdato de prata e vanadato de prata: biocompatibilidade e atividade antifúngica sobre biofilme de Candida albicans

Autor(es)

Bruna Natália Alves da Silva Pimentel

• Tipo de documento: Tese de Doutorado
• Imprenta: Araraquara. 2022-03-17.
• Instituição: Universidade Estadual Paulista (Unesp). Faculdade de Odontologia. Araraquara
• Data de defesa: 2022-02-10
• Orientador: Carlos Eduardo Vergani; Paula Aboud Barbugli

Resumo

A presente tese foi dividida em dois estudos que tiveram como objetivos (1) avaliar a citotoxicidade dos microcristais vanadato de prata (α-AgVO3; 3,9 µg/mL e 15,62 µg/mL), tungstato de prata (α-Ag2WO4; 7,81 µg/mL) e molibdato de prata (β-Ag2MoO4; 15,62 µg/mL) sobre células inflamatórias THP-1 e macrófago em monocamada, bem como quantificar a produção de superóxido, citocinas pró-inflamatórias e metaloproteinases de matriz (MMP); (2) avaliar a atividade antifúngica de α-AgVO3, α-Ag2WO4 e β-Ag2MoO4, sobre biofilme de Candida albicans cultivados sobre modelos de co-cultivo tridimensional (3D). A citotoxicidade e a resposta inflamatória de α-AgVO3, α-Ag2WO4 e β-Ag2MoO4 foram avaliadas sobre os modelos de co-cultivo 3D. No estudo 1, a viabilidade celular de THP-1 e macrófagos, após 24 horas de contato com α-AgVO3, α-Ag2WO4 e β-Ag2MoO4, foi determinada a partir do ensaio de alamarBlueTM. A produção da espécie reativa de oxigênio (superóxido) foi quantificada por fluorimetria e visualizada por microscopia de fluorescência confocal. Já a produção de citocinas e metaloproteinases de matriz foi quantificada por citometria de fluxo e ELISA, respectivamente. Os microcristais α-Ag2WO4, β-Ag2MoO4 e α-AgVO3, na concentração fungicida mínima (CFM: 15,62 µg/mL), promoveram pequena diminuição na viabilidade de THP-1 (77,3%, 69,29% e 73,96%, respectivamente). Já em macrófagos, apenas α-AgVO3 (CFM) foi capaz de diminuir a viabilidade celular (70,36%). Em ambas as células foram observadas produção de superóxido. Com relação às citocinas, houve aumento na produção de IL-8 por ambas as células, bem como aumento na produção de IL-1β por macrófagos. A MMP-8 não foi detectada no sobrenadante de THP-1 em nenhuma condição avaliada, enquanto a MMP-9 teve sua produção reduzida nas células THP-1 expostas a α-Ag2WO4 e β-Ag2MoO4. Já os sobrenadantes dos macrófagos apresentaram diminuição de MMP-8 e -9, independente do microcristal ao qual a célula foi exposta. No estudo 2, um modelo de co-cultivo 3D envolvendo três linhagens celulares foi desenvolvido e validado. Nestes modelos foi determinada a citotoxicidade, pelo ensaio colorimétrico MTT, de α-AgVO3, α-Ag2WO4 e β-Ag2MoO4, nas mesmas concentrações testadas no estudo 1. Foi avaliada também a ação dos microcristais sobre biofilmes de Candida albicans crescidos sobre os modelos 3D, simulando um processo infeccioso. Além disso, a modulação da resposta inflamatória foi verificada a partir da dosagem de citocinas pró-inflamatórias, na ausência e na presença dos microcristais, tanto nos modelos com infecção, quanto nos modelos sem infecção. O modelo de co-cultivo 3D se mostrou adequado para avaliar a biocompatibilidade de biomateriais bem como processos infecciosos. Entre os microcristais avaliados, apenas α-AgVO3 mostrou-se citotóxico, além de não ter sido efetivo contra o biofilme de C. albicans e não ter modulado a resposta inflamatória; α-Ag2WO4 apresentou atividade contra biofilme de C. albicans, com redução de 1,5 log10, semelhante à redução observada no controle com a droga padrão (fluconazol), e induziu a produção de IL-6, IL-8 e IL-1β; β-Ag2MoO4 não apresentou atividade contra o biofilme de C. albicans, pesar de ter sido biocompatível e capaz de diminuir a produção de TNFα nos modelos infectados. Com base nos resultados destes estudos, α-Ag2WO4 foi considerado um material promissor no tratamento de infecções por C. albicans. (AU)

• Processo FAPESP: 18/01677-8 - Biocompatibilidade dos microcristais ±-Ag2WO4, ²-Ag2MoO4 e ±-AgVO3: avaliação de citocinas pró-inflamatórias e metaloproteinases da matriz
• Beneficiário: Bruna Natalia Alves da Silva Pimentel
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado