Análise proteômica global comparativa de tecidos periodontais provenientes de dentes decíduos e permanentes humanos

Autor(es)

Priscila Alves Giovani

• Tipo de documento: Tese de Doutorado
• Imprenta: Piracicaba, SP.
• Instituição: Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Faculdade de Odontologia de Piracicaba
• Data de defesa: 2020-12-14

Membros da banca

Kamila Rosamilia Kantovitz; Saul Martins de Paiva; Isabela Almeida Pordeus; Eduardo César Almada Santos; Carolina Steiner Oliveira

• Orientador: Regina Maria Puppin Rontani; Kamila Rosamilia Kantovitz

Resumo

O ligamento periodontal (PDL) é um tecido conjuntivo especializado que conecta o dente ao osso alveolar, enquanto o cemento dentário (DC) é mineralizado, avascular, recobre a dentina radicular e tem como principal função a inserção de fibras do PDL à raiz do dente. Juntos, desempenham um papel crítico na ancoragem dentária. Faltam informações sobre o padrão molecular dos tecidos periodontais dos decíduos (Dec) e permanentes (Perm). A presente tese caracterizou o proteoma da membrana das células do PDL e da matriz extracelular do DC a fim de distinguir as dentições. Proteínas foram extraídas da membrana celular de culturas primárias de DecPDL (n=3) e PermPDL (n=3) e da matriz extracelular do cemento de 25 Dec e 12 Perm, agrupados em pools de DecDC (n=5) e PermDC (n=4) e analisadas por cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massa (LC-MS/MS). O teste estatístico beta-binomial foi aplicado aos spectrum counts normalizados para determinar as proteínas diferencialmente expressas (PDE) (p <0,05). Os achados para PDL foram validados por reação em cadeia da polimerase quantitativa e ensaios de Western blot em tecidos humanos frescos (n=8) e culturas primárias (n=6). Além disso, verificou-se via microscopia confocal a expressão de proteínas alvo nas culturas de PDL. Diferentemente, imuno-histoquímica foi usada para validar as proteínas selecionadas do DC. No PDL, detectou-se um total de 752 proteínas: 142 exclusivas aos DecPDL, 115 exclusivas aos PermPDL e 495 comuns. Sendo 23 PDE: 3 mais abundantes em DecPDL e 10 encontradas exclusivamente em DecPDL; 2 mais abundantes em PermPDL e 8 exclusivas em PermPDL. A análise comparativa de gene ontology (GO) em PDL evidenciou que a maioria das diferenças envolveram o sistema endomembrana (PICALM, STX4 e LRP10), atividade da hidrolase (NCSTN e XRCC6), ligação proteica (PICALM, STX4, GPNMB, VASP, ESYT2 e LRRC15) e atividade de isomerase (FKBP8). Ao nível de transcrição, confirmou-se a tendência de maior expressão de PICALM em DecPDL e de ESYT2 e LRRC15 em PermPDL, reproduzindo os achados proteômicos em tecidos frescos do PDL. Além disso, confirmou-se via Western blot níveis aumentados de PICALM, LRRC15 e ESYT2 em células e/ou tecidos frescos, e via microscopia confocal as tendências para expressão de PICALM e LRRC15 em células do PDL. Em DC, identificou-se um total de 510 proteínas: 123 exclusivas para DecDC, 128 exclusivas para PermDC e 259 comuns. Das 60 PDE, 17 foram mais abundantes em DecDC, incluindo MPO (exclusiva em DecDC [p <0,05]), enquanto 43 foram mais abundantes em PermDC, incluindo DCN e BGLAP (aumentadas em PermDC [p <0,05]). A análise de GO indicou proteínas relacionadas a processos biológicos que incluíam localização e resposta ao stress; e PDE enriquecidas para função molecular em adesão celular, ligação molecular, ligação proteica de citoesqueleto, atividade molecular estrutural e ligação do complexo macromolecular. A imuno-histoquímica confirmou as tendências para PDE selecionadas em dentes humanos. Relatamos a primeira caracterização abrangente da maquinaria proteômica de membrana de células do PDL e da matriz extracelular do DC de Dec vs. Perm. Juntos, identificamos um perfil molecular distinto para essas dentições, incluindo proteínas exclusivas (AU)

• Processo FAPESP: 16/02942-1 - Análise Global do Protema do Ligamento Periodontal.
• Beneficiário: Priscila Alves Giovani
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado