Avaliação da fagocitose de leptospira por macrófagos de camundongos deficientes de C3 do sistema complemento

Autor(es)

Tiago Francisco da Silva

• Tipo de documento: Dissertação de Mestrado
• Imprenta: São Paulo.
• Instituição: Universidade de São Paulo (USP). Instituto de Ciências Biomédicas (ICB/SDI)
• Data de defesa: 2021-06-16

Membros da banca

Lourdes Isaac; Lorena Bavia; Niels Olsen Saraiva Câmara; Lucile Maria Floeter Winter

• Orientador: Lourdes Isaac

Resumo

A leptospirose é uma zoonose importante para a saúde pública, causada por bactérias espiroquetas do gênero Leptospira. A resposta imune inata contra essas bactérias depende em grande parte da fagocitose e da ativação do Sistema Complemento. Este sistema é composto por diversas proteínas solúveis ou presentes na superfície celular, que atuam tanto na imunidade inata quanto na adaptativa. C3 é a proteína mais abundante desse sistema e a sua importância fica evidenciada especialmente em pacientes deficientes, pois são muito suscetíveis a repetidas infecções. Diversos estudos têm mostrado que a proteína C3 desempenha um papel fundamental no combate a infecções, responsável pela geração de opsoninas que facilitam a eliminação de microrganismos, entre estes as leptospiras, mas o papel de C3 para a diferenciação e resposta intracelular em leucócitos ainda é pouco entendido. Para entender melhor a importância de C3 para o desenvolvimento de células da imunidade inata, este trabalho buscou comparar diversos parâmetros celulares importantes para a fagocitose de leptospiras em macrófagos de camundongos C57Bl/6 (selvagens) e C57Bl/6 C3-/- (deficientes de C3). Inicialmente, as populações celulares presentes no exsudado peritoneal foram avaliadas por citometria de fluxo. Observamos aumento do número de macrófagos residentes (F4/80high) e menor número de macrófagos diferenciados a partir de monócitos (F4/80low) em camundongos deficientes de C3, demonstrando que talvez o recrutamento celular destas células esteja sendo afetado, implicando em menor afluxo destas células inflamatórias para o sítio inflamatório. Como o citoesqueleto de macrófagos desempenha um papel crucial para a função fagocítica, e tendo em vista sua importância para a migração e formação de evaginações e invaginações que permitem o englobamento de partículas, analisamos a presença e distribuição de -tubulina e F-actina em macrófagos peritoneais e diferenciados da medula óssea. A ausência de C3 afetou de maneira significativa a morfologia e tamanho dessas células, uma vez que na ausência de C3 os macrófagos apresentaram menor intensidade de marcação com anti--tubulina e redução do tamanho celular (área), evidenciada pelo uso de faloidina (reage com F-actina). Em seguida, a presença das seguintes moléculas de superfície celular foi quantificada por citometria de fluxo: CD11a/CD18, CD11b, CD11c, CD64, CD197, CD206, CD282, CD284, CD36, CD80, MHC II e CD21/CD35. A presença dos seguintes receptores CD282 (TLR2), CD64 (FcR1) e CD36 (scavenger receptor ) foi aproximadamente 20 % menor em macrófagos diferenciados da medula óssea de camundongos deficientes de C3, quando comparada com os macrófagos de camundongos selvagens. Entretanto, a presença desses mesmos receptores foi semelhante em macrófagos peritoneais dos dois grupos de camundongos. Por outro lado, a presença do receptor de Complemento 4 (CR4; CD11c/CD18) foi seis vezes mais elevada em macrófagos peritoneais e diferenciados da medula óssea de B6.C3-/-. Avaliamos também a fagocitose de Zimosan e E. coli K12 que foi maior em macrófagos B6.C3-/-, o que pode estar vinculado as alterações que observamos na morfologia celular e na expressão de determinados receptores de membrana. Surpreendentemente, a fagocitose in vivo de L. interrogans por macrófagos da cavidade peritoneal foi maior em camundongos deficientes de C3. No entanto, ainda há necessidade de se acertar melhor as condições experimentais. Por fim, medimos a ação de ROS e ativação de MAPK em macrófagos de ambos os grupos de camundongos, após estímulo com 12-O-tetradecanoilforbol-13-acetato (TPA). Tais parâmetros foram menos intensos em macrófagos de B6.C3-/-, confirmando a importância de C3 para a sinalização celular, e merece ser mais amplamente estudado no futuro. Em conjunto, nossos resultados sugerem que a presença de C3 durante o desenvolvimento ontogenético de camundongos C57Black/6 pode influenciar determinados parâmetros morfológicos e funcionais de macrófagos, células estas de fundamental importância para a resposta imune inata e adquirida. (AU)

• Processo FAPESP: 19/01435-7 - Avaliação da fagocitose de leptospira por macrófagos peritoneais de camundongos C3 deficientes
• Beneficiário: Tiago Francisco da Silva
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado