Interação das células epiteliais alveolares tipo II infectadas por Mycobacterium tuberculosis com populações de macrófagos infectados ou não

Autor(es)

Ualter Guilherme Cipriano Rosa

• Tipo de documento: Dissertação de Mestrado
• Imprenta: Ribeirão Preto.
• Instituição: Universidade de São Paulo (USP). Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (PCARP/BC)
• Data de defesa: 2022-12-21

Membros da banca

Vania Luiza Deperon Bonato

• Orientador: Vania Luiza Deperon Bonato

Resumo

A tuberculose era a doença que causava o maior número de mortes no mundo decorrente do contato com um único agente infeccioso, até o surgimento da pademia da COVID-19. Aproximadamente 5-10% de pessoas infectadas por Mycobacterium tuberculosis, o bacilo causador desta doença, perfazem o número de mais de 10 milhões de pessoas sintomáticas e doentes. Os demais 90-95% de indivíduos infectados têm infecção latente/assintomática, e correspondem a ¼ da população mundial. Acredita-se que a imunidade inata seja fundamental para indução da latência. Inseridos na imunidade inata, macrófagos, células dendríticas e células epiteliais alveolares estão entre as primeiras células que interagem com M. tuberculosis. O objetivo do presente estudo foi avaliar a interação de células epiteliais alveolares infectadas por M. tuberculosis com macrófagos, partindo-se da hipótese de que o microambiente gerado por células epiteliais alveolares infectadas irá afetar a resposta dos macrófagos. Utilizamos a linhagem (MLE-15) de células epiteliais alveolares do tipo II, que foram infectadas por M. tuberculosis (MOI 10) e o sobrenadante dessa cultura celular, denominado meio condicionado de células infectadas (ICM), foi usado para tratar macrófagos derivados de precursores da medula óssea (BMDM). Como controles experimentais foram usados meio condicionado de células MLE-15 não infectadas (NICM), LPS ou apenas a infecção com M. tuberculosis. Macrófagos tratados com ICM exibiram aumento na expressão de arginase 1 (Arg1), secretaram IL-1β, TNF e IL-10. Macrófagos alveolares da linhagem AMJ2-C11, expostos ao ICM também apresentaram aumento na expressão de Arg1. BMDM expostos previamente ao ICM e, em seguida, infectados por M. tuberculosis, apresentaram redução da carga bacilar, secretaram concentrações significativas de IL-1β e IL-6, além do aumento da expressão da enzima óxido nítrico sintase induzida (iNOS), e morte por necrose quando comparado aos macrófagos não estimulados com ICM. Para avaliar a função desses macrófagos in vivo, transferimos BMDM previamente tratados com ICM para animais C57BL/6 wild-type (WT) e avaliamos o quadro pulmonar 10 dias após a infecção. Animais que receberam macrófagos expostos previamente ao ICM, apresentaram redução da carga bacilar e da inflamação nos pulmões, aumento de IL-1β em células totais dos pulmões, e maior expressão de iNOS em macrófagos alveolares e intersticiais comparados com o grupo de animais que não receberam transferência. Células epiteliais dos pulmões dos animais infectados exibiram maior morte significativa por necrose, independente do tratamento feito nos macrófagos transferidos. Em conclusão, a interface das células epiteliais do tipo II infectadas por M. tuberculosis com macrófagos é importante para ativar e regular a resposta inata, auxiliando na contenção da carga bacilar. A identificação das moléculas presentes no meio condicionado (ICM) poderá possibilitar o surgimento de novos alvos para terapias imunológicas contra a tuberculose. (AU)

• Processo FAPESP: 19/24681-3 - Interação das células epiteliais alveolares do tipo II infectadas por Mycobacterium tuberculosis com populações de macrófagos infectados ou não
• Beneficiário: Ualter Guilherme Cipriano Rosa
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado