Efeito da interação de macrófagos co-cultivados com Leishmania amazonensis e bactérias no controle da infecção parasitária: Effect of the interaction of macrophages co-cultivated with Leishmania amazonensis and bacteria in the control of parasitary infection

Autor(es)

Pedro Henrique Gallo Francisco

• Tipo de documento: Dissertação de Mestrado
• Imprenta: Campinas, SP.
• Instituição: Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Instituto de Biologia
• Data de defesa: 2023-03-08

Membros da banca

Selma Giorgio; Danilo Ciccone Miguel; Fausto Bruno dos Reis Almeida

• Orientador: Marcelo Brocchi; Selma Giorgio

Resumo

As leishmanioses são doenças negligenciadas, causadas pelo protozoário pertencente ao gênero Leishmania spp., parasita principalmente de macrófagos. As formas da doença variam desde lesões cutâneas simples que podem ser autorresolutivas, até a forma visceral que, quando não tratada, pode ser fatal. No Brasil, as principais espécies envolvidas na leishmaniose cutânea localizada (LCL) são L. braziliensis e L. amazonensis. A úlcera típica da LCL é indolor e costuma localizar-se em áreas expostas da pele, onde coinfecções secundárias causadas por Pseudomonas aeruginosa e Staphylococcus aureus são observadas com frequência em clínica. O papel da coinfecção secundária na evolução e desfecho da LCL não foi comprovado, mas o conjunto de sinais e sintomas resultantes do processo pode prejudicar o quadro clínico dos hospedeiros infectados, requerendo tratamento específico. Este trabalho teve como objetivo, analisar a influência da presença de vesículas de membrana externa (OMVs) de P. aeruginosa ATCC 27853, ou de vesículas extracelulares (EVs) de S. aureus ATCC 25923, frequentemente reportadas durante a LCL, em macrófagos previamente infectados com L. amazonensis, e se a carga parasitária, produção de óxido nítrico (NO) e de citocinas são alteradas. As análises das vesículas das bactérias estudadas, por microscopia eletrônica de transmissão e nanorastreamento, são consistentes com os achados da literatura, acerca de seu diâmetro e concentração. Os resultados mostraram reduções significativas na porcentagem de macrófagos infectados (13,29% - 80,6%), número de amastigotas/macrófago infectado, Índice de Infecção (IF) e número de macrófagos viáveis (29,11% - 77,88%), nas co-culturas de macrófagos infectados com L. amazonensis e expostos as vesículas de ambas as bactérias. Foram observadas alterações morfológicas nas culturas de macrófagos expostas as vesículas, sem infecção pelo parasita, quando comparado com o controle saudável, sem exposição as vesículas. As quantificações de NO, IL-6 e IL-4 revelaram uma produção diminuída, enquanto as citocinas IL-1? e TNF-? revelaram uma produção aumentada, nas co-culturas de macrófagos infectadas com L. amazonensis e expostas as vesículas de ambas as bactérias. Esses dados sugerem um possível efeito de modulação negativa da resposta celular mediada por NO, IL-6 e IL- 4, e uma regulação positiva para a resposta inflamatória, quando as vesículas entram em contato com macrófagos previamente infectados com o parasita, sugerindo um possível papel nas reduções nos parâmetros mencionados anteriormente. Dados reportados na literatura, demonstraram que vesículas de bactérias são imunogênicas e medeiam a resposta inflamatória por receptores Toll-like (TLR), ativando a via dos inflamassomos NLRP3 e das caspases, desencadeando disfunção mitocondrial por proteínas apoptóticas. Conclusivamente, os dados mostram que o modelo de infecção de macrófagos com L. amazonensis e exposição as vesículas, mimetiza e reproduz uma interação entre hospedeiro-parasita-bactéria, pois são altamente imunogênicas em células hospedeiras, podem ativar a via TLR, e serem utilizadas como importantes alvos para plataformas vacinais futuramente (AU)

• Processo FAPESP: 19/11061-7 - Efeito da interação de macrófagos co-cultivados com Leishmania spp. e bactérias no controle da infecção parasitária
• Beneficiário: Pedro Henrique Gallo Francisco
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado