Caracterização de células endometriais humanas em sistema 3D: o modelo e suas possibilidades de estudo

Autor(es)

Bárbara Stefany da Silva Souza

• Tipo de documento: Dissertação de Mestrado
• Imprenta: São Paulo.
• Instituição: Universidade de São Paulo (USP). Instituto de Ciências Biomédicas (ICB/SDI)
• Data de defesa: 2024-01-19

Membros da banca

Estela Maris Andrade Forell Bevilacqua; José Maria Soares Júnior; Glaucia Maria Machado Santelli; Sandra Maria Miraglia Valdeolivas

• Orientador: Estela Maris Andrade Forell Bevilacqua

Resumo

Introdução: A modelagem in vitro de um sistema de cocultivo tridimensional (3D), utilizando células endometriais humanas e eventualmente células embrionárias é uma área inovadora que surge com a possibilidade de aumentar o conhecimento da fisiologia endometrial e da implantação embrionária. Objetivos: Caracterizar um modelo de estudo 3D com células endometriais que permitam estudos da fisiologia uterina. Material e métodos: Células endometriais foram isoladas de biópsias uterinas femininas (n=3), coletadas de acordo com protocolos de ética em pesquisa humana (IC-USP, CONEP). As biópsias foram digeridas com colagenase II/DNAse I e filtradas para retenção das glândulas endometriais. Estas foram tripsinizadas para obtenção de células epiteliais isoladas. Esferas magnéticas anti-CD105 (MACS) foram usadas para a seleção positiva e negativa de células endoteliais e estromais, respectivamente. A pureza das amostras uterinas foi avaliada por imunofluorescência/ imunohistoquímica para as seguintes proteínas: vimentina, citoqueratina, IGFBP1 e CD105/VEGFR2. O sistema de cocultura 3D incluiu a preparação de uma matriz extracelular composta por uma mistura de fibronectina, ácido hialurônico, colágeno V, colágeno I e colágeno III em um sistema Transwell contendo células estromais, sobre a qual as células endoteliais e epiteliais foram plaqueadas. Como um ensaio preliminar, trofectoderma de embriões aneuploides (n=3) foram coletados e inseridos sobre as células endometriais cultivadas em sistema 3D, onde permaneceram por 48 horas e então foram processados para análise histológica. Resultados: O isolamento, cultivo e preparo da matriz de suporte foram padronizados e as culturas caracterizadas. O endométrio reconstituído foi caracterizado morfologicamente por coloração H&E e imunohistoquímica mostrando uma organização típica em que células vimentina-positivas se mantinham viáveis e embebidas pela matriz extracelular. Células endoteliais e epiteliais depositadas sobre essa matriz se organizaram sob a forma de uma monocamada. Apenas um fragmento embrionário constituído por trofectoderma apresentou aderência às células endometriais. Conclusão: O sistema de cocultivo apresentou células endoteliais, epiteliais e estromais viáveis, com características semelhantes às observadas in vivo, no que tange a sua organização tecidual e a expressão de biomarcadores típicos. A adesão do trofectoderma a esta camada sugere que mecanismos associados à implantação embrionária podem ser estudados neste modelo. (AU)

• Processo FAPESP: 20/14982-3 - Cocultura de células trofoblásticas e endoteliais em sistema 3D mimetizando a implantação embrionária para o estudo do papel do trofoblasto na indução de apoptose
• Beneficiário: Bárbara Stefany da Silva Souza
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado