Importância da Oligopeptidase B (OPB) na infecção de macrófagos medulares por Leishmania (Leishmania) amazonensis .

Autor(es)

Gustavo Rolim Barbosa

• Tipo de documento: Dissertação de Mestrado
• Imprenta: São Paulo.
• Instituição: Universidade de São Paulo (USP). Instituto de Ciências Biomédicas (ICB/SDI)
• Data de defesa: 2021-04-30

Membros da banca

Beatriz Simonsen Stolf Carboni; Adriano Cappellazzo Coelho; José Angelo Lauletta Lindoso; Adriana Rios Lopes Rocha

• Orientador: Beatriz Simonsen Stolf Carboni

Resumo

Leishmania spp. são protozoários parasitas causadores da leishmaniose, doença endêmica em mais de 98 países, com mais de 1 milhão de casos novos a cada ano no munLeishmania spp. são protozoários parasitas causadores da leishmaniose, doença endêmica em mais de 98 países, com mais de 1 milhão de casos novos a cada ano no mundo. A infecção sintomática no homem se manifesta sob diferentes formas clínicas, que são agrupadas em tegumentar/cutânea e visceral. O parasita é transmitido aos hospedeiros através da picada de insetos flebotomíneos fêmeas. A Leishmania transmitida na forma promastigota pelo vetor converte-se na forma amastigota dentro das células fagocíticas do hospedeiro vertebrado. Para sobreviver aos ambientes variados e hostis o parasita possui diversos fatores de virulência cujas abundâncias variam de acordo com a fase de seu ciclo biológico. A oligopeptidase B (OPB) é uma serino peptidase da família das prolil peptidases (clã SC, família S9), caracterizada pela presença de uma serina no sítio ativo. Essa proteína tem sido retratada como fator de virulência em tripanossomatídeos. De fato, infecções de camundongos com linhagens de Leishmania deficientes em OPB mostram desenvolvimento tardio de lesões, porém muito pouco se sabe sobre o papel dessa proteína no processo de infecção pelo parasita, que a secreta em exossomos. Para preencher as lacunas existentes, este projeto teve como objetivo produzir a OPB recombinante de L. (L.) amazonensis e avaliar seus efeitos na infecção de macrófagos por esse parasito. Conseguimos produzir e purificar a OPB recombinante solúvel em sistema bacteriano, e utilizamos a proteína recombinante para a produção de um soro anti-OPB em camundongos BALB/c. Avaliamos a atividade e o perfil enzimático da OPB recombinante, e nossos resultados apontam que a enzima é ativa e possui um perfil muito parecido com OPBs de outras espécies de Leishmania. Os ensaios de infecção com macrófagos medulares de BALB/c mostram que a OPB recombinante não altera o perfil de infecção de L. (L.) amazonensis da cepa LV79, no entanto mais ensaios são necessários para determinar a importância dessa proteína na infecção por L. (L.) amazonensis.do. A infecção sintomática no homem se manifesta sob diferentes formas clínicas, que são agrupadas em tegumentar/cutânea e visceral. O parasita é transmitido aos hospedeiros através da picada de insetos flebotomíneos fêmeas. A Leishmania transmitida na forma promastigota pelo vetor converte-se na forma amastigota dentro das células fagocíticas do hospedeiro vertebrado. Para sobreviver aos ambientes variados e hostis o parasita possui diversos fatores de virulência cujas abundâncias variam de acordo com a fase de seu ciclo biológico. A oligopeptidase B (OPB) é uma serino peptidase da família das prolil peptidases (clã SC, família S9), caracterizada pela presença de uma serina no sítio ativo. Essa proteína tem sido retratada como fator de virulência em tripanossomatídeos. De fato, infecções de camundongos com linhagens de Leishmania deficientes em OPB mostram desenvolvimento tardio de lesões, porém muito pouco se sabe sobre o papel dessa proteína no processo de infecção pelo parasita, que a secreta em exossomos. Para preencher as lacunas existentes, este projeto teve como objetivo produzir a OPB recombinante de L. (L.) amazonensis e avaliar seus efeitos na infecção de macrófagos por esse parasito. Conseguimos produzir e purificar a OPB recombinante solúvel em sistema bacteriano, e utilizamos a proteína recombinante para a produção de um soro anti-OPB em camundongos BALB/c. Avaliamos a atividade e o perfil enzimático da OPB recombinante, e nossos resultados apontam que a enzima é ativa e possui um perfil muito parecido com OPBs de outras espécies de Leishmania. Os ensaios de infecção com macrófagos medulares de BALB/c mostram que a OPB recombinante não altera o perfil de infecção de L. (L.) amazonensis da cepa LV79, no entanto mais ensaios são necessários para determinar a importância dessa proteína na infecção por L. (L.) amazonensis. . (AU)

• Processo FAPESP: 19/02391-3 - Importância da oligopeptidase B (OPB) na infecção de macrófagos por L. (L.) amazonensis
• Beneficiário: Gustavo Rolim Barbosa
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado