Efeito do tratamento com ácido fólico no perfil de metilação do DNA de adipócitos de pacientes com lúpus eritematoso sistêmico: estudo in vitro

Autor(es)

Letícia Lobato Souza

• Tipo de documento: Dissertação de Mestrado
• Imprenta: São Paulo.
• Instituição: Universidade de São Paulo (USP). Faculdade de Medicina (FM/SBD)
• Data de defesa: 2024-10-29

Membros da banca

Carolina Nicoletti Ferreira Fino; Guilherme Giannini Artioli; Lígia Moriguchi Watanabe

• Orientador: Carolina Nicoletti Ferreira Fino

Resumo

O Lúpus Eritematoso Sistêmico (LES) é uma doença crônica autoimune com etiologia multifatorial que afeta diversos órgãos e sistemas, impactando severamente a qualidade de vida das pessoas acometidas. Fatores genéticos, epigenéticos, hormonais, ambientais e imunológicos estão envolvidos em sua fisiopatologia, com destaque para as alterações nos níveis de metilação do DNA, que tem sido propostas como fator contribuinte para o desenvolvimento da autoimunidade. A obesidade pode agravar as manifestações clínicas da doença devido à inflamação sistêmica. Neste cenário, evidências sugerem uma relação negativa entre LES e obesidade. O ácido fólico, conhecido por ser um doador de grupo metil, pode influenciar a metilação do DNA. Estudos sugerem que baixos níveis de folato estão associados à diminuição da metilação global do DNA, aumentando o risco de LES e outras doenças autoimunes. Este estudo teve como objetivo avaliar se o tratamento in vitro com ácido fólico foi capaz de modular o perfil de metilação do DNA em culturas de adipócitos representativos de LES, verificando possíveis diferenças entre os grupos peso adequado (n=1) e obesidade (n=1). Os objetivos secundários incluíram a comparação dos níveis de expressão dos genes adiponectina (ADIPOQ), leptina (LEP), interleucina-6 (IL-6), transdutor de sinal e ativador da transcrição 3 (STAT3), modificador do elemento responsivo ao cAMP 2 (CREM2) e DNA metiltransferase 1 (DNMT1) antes e após o tratamento. Este é um estudo experimental in vitro com adipócitos provenientes de tecido adiposo de pacientes com LES e peso adequado ou obesidade. Os adipócitos foram isolados, cultivados e tratados com ácido fólico diluído em NaOH (0,02g NaOH qs) por 48 horas. Após este período, foi realizada a extração de ácidos nucleicos para análise do perfil de metilação do DNA e de expressão gênica. Na comparação entre os grupos peso adequado e obesidade, foram identificadas 1.755 CpGs diferencialmente metiladas (CpGDMs), com predominância de hipometilação no grupo obesidade. As análises de enriquecimento associaram essas CpGDMs a vias metabólicas relacionadas ao diabetes mellitus tipo 1. Quando o grupo peso adequado foi comparado antes e depois do tratamento com ácido fólico, observou-se hipometilação em 755 CpGs após o tratamento, com destaque para vias metabólicas como a diferenciação dos linfócitos Th1 e Th2. Já nas culturas do grupo obesidade, o tratamento com ácido fólico resultou em hipermetilação da maioria das CpGs, associadas principalmente à via de sinalização cAMP, importante na patogênese do LES. Os resultados da expressão gênica mostraram uma variação significativa entre as culturas celulares de adipócitos dos grupos peso adequado e obesidade. Os genes ADIPOQ, LEP e IL-6 apresentaram maior expressão na cultura obesidade em comparação com a peso adequado, tanto antes quanto após o tratamento. A suplementação aumentou os níveis de expressão do gene STAT3 em ambas as culturas obesidade e peso adequado. Após o tratamento, a expressão de CREM2 aumentou tanto na cultura peso adequado quanto na cultura obesidade. O tratamento com ácido fólico elevou os níveis de expressão do gene IL-6 na cultura peso adequado. Assim, o tratamento in vitro com ácido fólico alterou o perfil de metilação do DNA e, em partes, de expressão gênica nas culturas de adipócitos representativas do ambiente LES, com efeitos distintos na presença ou não de obesidade associada. Observou-se que o tratamento modificou os níveis de metilação em diferentes genes associados a vias metabólicas, variando entre os grupos, destacando-se o papel da obesidade como um fator agravante da inflamação no contexto do LES (AU)

• Processo FAPESP: 22/09301-2 - Efeito do ácido fólico nos níveis de metilação do DNA dos adipócitos em pacientes com lúpus: estudo in vitro
• Beneficiário: Letícia Lobato Souza
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado