Solução irrigadora à base de probiótico: Avaliação microscópica, genética e molecular do efeito na expressão de armadilhas extracelulares de neutrófilos, em dentes de ratos com lesões periapicais induzidas

Autor(es)

Ana Paula Gomes e Moura

• Tipo de documento: Dissertação de Mestrado
• Imprenta: Ribeirão Preto.
• Instituição: Universidade de São Paulo (USP). Faculdade de Odontologia de Ribeirão Preto (PCARP/BC)
• Data de defesa: 2024-08-21

Membros da banca

Raquel Assed Bezerra Segato; Paulo Sérgio Cerri; Paulo Nelson Filho; Thais Marchini de Oliveira Valarelli

• Orientador: Léa Assed Bezerra da Silva

Resumo

As Armadilhas Extracelulares de Neutrófilos (NETs) são uma das formas de atuação dos neutrófilos na resposta imune inflamatória do hospedeiro, mas em caso de formação exacerbada podem levar à dano tecidual. Paralelamente, estudos anteriores demonstraram o efeito positivo de probióticos em infecções pulpares. Contudo, o efeito de probióticos sobre as NETs ainda é desconhecido. Assim, o objetivo geral deste estudo foi avaliar o efeito da administração local do probiótico Bifidobacterium animalis subsp. lactis (B. lactis) HN019, como solução irrigadora, na expressão das NETs e do peptídeo antimicrobiano CRAMP, em lesões periapicais induzidas experimentalmente em ratos. Após a indução das lesões periapicais experimentalmente, os animais foram divididos em três grupos e quatro subgrupos de acordo com a solução irrigadora e o número de sessão/irrigação, conforme segue: Grupo I (9 animais): sem tratamento; Grupo II: Hipoclorito de Sódio a 2,5% (18 animais) - IIa: uma irrigação (9 animais) e; IIb: duas irrigações (9 animais); e Grupo III: Probiótico (18 animais) - IIIa: uma irrigação (9 animais) e; IIIb: duas irrigações (9 animais). O probiótico B. lactis HN019 foi utilizado como solução irrigadora (2,7x109 UFC em meio aquoso em 2% de carboximetilcelulose) com volume de 600&micro;L, em aspiração concomitante, além da adição de 5&mico;L que foram mantidos no canal radicular. Após 21 dias da indução das lesões periapicais, os animais foram eutanasiados e as hemi-maxilas e hemi-mandíbulas direitas foram processadas para análises microscópicas, genéticas e moleculares. As lâminas foram coradas com hematoxilina e eosina (HE) e analisadas em microscopia óptica para avaliação descritiva e semi-quantitativa dos parâmetros do ligamento periodontal, infiltrado inflamatório, reabsorção cementária e reabsorção óssea, além de contagem de neutrófilos e histomorfometria da área das lesões periapicais. Adicionalmente, foi realizada imunohistoquímica para a marcação de CRAMP (ortólogo do LL-37 humano) e imunofluorescência indireta para detecção das NETs por meio dos marcadores de elastase de neutrófilos (NE), histona H3 citrulinada (H3Cit) e mieloperoxidase (MPO). As hemi-maxilas direitas foram processadas para a realização da reação em cadeia da polimerase em tempo real (qRT-PCR) para avaliação da expressão do mRNA dos genes ELANE, H3F3B, MPO e CAMP. Os resultados obtidos foram submetidos à análise estatística por meio dos testes de Shapiro-Wilk ou KruskalWallis (H), considerando a abordagem post hoc de Dwass-Steel-Chritchlow-Fligner, com nível de significância de 5%. A comparação dos escores da análise semi-quantitativa indicou que em relação ao ligamento periodontal e ao infiltrado inflamatótio houve diferença significativa entre os grupos (p=0,03 e p=0,004, respectivamente). Em relação ao tecido ósseo, houve 100% de presença de reabsorção no grupo sem irrigação (Grupo I) e nos grupos nos quais o hipoclorito de sódio a 2,5% foi utilizado como solução irrigadora (Grupo IIa e IIb), enquanto os grupos irrigados com probiótico tiveram 28,57% e 75% de presença, nos grupos GIIIa e GIIIb, respectivamente. Observou-se reabsorção cementária no grupo sem irrigação (Grupo I) e uma irrigação com hipoclorito de sódio a 2,5% (GIIa) em 100% dos casos, enquanto a presença da reabsorção cementária no grupo duas irrigações com hipoclorito de sódio a 2,5% (GIIb) foi de 71,43% e nos grupos do probiótico foi de apenas 14,29%, no que recebeu uma irrigação (GIIIa), e 50% no que recebeu duas irrigações (GIIIb). A contagem do número de neutrófilos não apresentou diferença significativa entre os grupos (p=0,064). Em relação à comparação da área da lesão periapical formada (mm2), houve diferença significativa entre os grupos (p=0,002), indicando que o grupo que recebeu uma irrigação com solução à base de probiótico produziu lesões periapicais com área significativamente menor em relação à ausência de irrigação. Sobre a porcentagem de área marcada para CRAMP, foi observada diferença significativa entre os grupos (p=0,001), demonstrando que uma irrigação com solução à base de probiótico e duas irrigações com hipoclorito de sódio a 2,5% estiveram associadas a uma maior área imunomarcada, em relação à ausência de irrigação. Ainda, com relação à porcentagem de NETs por área, observou-se diferença estatística significante na avaliação da H3Cit (p=0,002), MPO (p<0,001) e NE (p=0,001). Em relação à expressão gênica do CAMP, também foi observada diferença significante entre os grupos (p<0,001), além do MPO e ELANE (p=0,002 e p=0,001, respectivamente). Entretanto, não houve diferença significativa entre os grupos na expressão do H3F3B (p=0,307). Com base nos resultados deste estudo, conclui-se que a solução irrigadora à base de probiótico foi capaz de reduzir a formação das armadilhas extracelulares de neutrófilos. Além disso, a solução de probiótico estimulou a expressão do CRAMP e apresentou efeito positivo contra a reabsorção cementária e óssea. (AU)

• Processo FAPESP: 22/16612-4 - Solução irrigadora à base de probiótico: avaliação microscópica e molecular da expressão de armadilhas extracelulares de neutrófilos, em dentes com lesões periapicais induzidas em ratos
• Beneficiário: Ana Paula Gomes e Moura
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado