Aplicações da espectrometria de massas em caracterização e quantificação de matrizes biológicas

Autor(es)

Andréia de Melo Porcari

• Tipo de documento: Dissertação de Mestrado
• Imprenta: Campinas, SP.
• Instituição: Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Instituto de Química
• Data de defesa: 2012-12-03

Membros da banca

Marcos Nogueira Eberlin; Isabel Cristina Sales Fontes Jardim; Ed Hoffman Madureira

• Orientador: Marcos Nogueira Eberlin

Resumo

O presente trabalho utiliza a Espectrometria de Massas para caracterização e quantificação de diferentes analitos em matrizes biológicas. Inicialmente é demonstrado o desenvolvimento de uma técnica para análise direta de triacilgliceróis (TAG) em carnes e tecidos, que podem então ser caracterizados por seu perfil lipídico. Nesta técnica, uma etapa de foto aquecimento visa extrair quase instantaneamente TAG da matriz, utilizando pouco ou nenhum solvente. O conteúdo extraído e coletado num papel pardo é então analisado por EASI-MS (Easy Ambient Sonic-spray Ionization - Mass Spectrometry), revelando o perfil de TAG em poucos segundos, sem necessidade de hidrólise, derivação ou outras extrações. Thermally-imprinted EASI-MS (T-EASI-MS) é uma técnica capaz de diferenciar tipos de carnes e seus resultados mostraram-se concordantes com a literatura e com outras técnicas tradicionais para análise de lipídios. Num segundo momento, utilizou-se a espectrometria de massas como ferramenta de quantificação, através do desenvolvimento de dois métodos analíticos para análise de cortisol em plasma e leite bovinos, utilizando LC-MS/MS (cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas seqüencial). Os métodos aqui desenvolvidos foram validados utilizando a metodologia de compatibilização de matriz (para o plasma) e de calibração direta em solvente (curva não extraída) para o leite. Ambos os métodos empregaram pequeno volume de amostra e forneceram baixos limites de quantificação (0,1 ng mL e 0,15 ng mL de cortisol para o plasma e leite, respectivamente). A metodologia desenvolvida foi aplicada para análise de dois experimentos veterinários. No primeiro foi investigada a correlação entre as concentrações de cortisol no plasma e no leite bovino, bem como o efeito da ordenha sobre a concentração do cortisol nesses fluídos biológicos. No segundo nível de cortisol em vacas com e sem mastite sub-clínica foi investigado e os resultados foram comparados aos resultados obtidos por ELISA (Enzime-linked Immunosorbent Assay) para as mesmas amostras (AU)

• Processo FAPESP: 10/03938-1 - Desenvolvimento e validação de um método de quantificação de cortisol por LC-MS/MS para estudos de bem-estar animal em bovinos
• Beneficiário: Andréia de Melo Porcari
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado