Estudo da diversidade bacteriana de canais radiculares infectados em casos de abscesso apical agudo por cultura, clonagem e sequenciamento do gene 16S rRNA

Autor(es)

Letícia Maria Menezes Nobrega

• Tipo de documento: Tese de Doutorado
• Imprenta: Piracicaba, SP.
• Instituição: Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Faculdade de Odontologia de Piracicaba
• Data de defesa: 2012-11-23

Membros da banca

Brenda Paula Figueiredo de Almeida Gomes; Fabio Roberto Dametto; Rejane Andrade de Carvalho; Rogerio de Castilho Jacinto; Caio Cezar Randi Ferraz

• Orientador: Brenda Paula Figueiredo de Almeida Gomes

Resumo

Abscessos apicais agudos são condições frequentes na urgência endodôntica. São infecções polimicrobianas que apresentam variações entre indivíduos, e afetam o sistema de canais radiculares e tecidos periapicais. Associações bacterianas podem ser importantes, agindo sinergicamente e aumentando sua virulência, o que agrava os danos causados no hospedeiro. Considerando a etiologia microbiana das alterações pulpares e periapicais, é de fundamental importância identificar corretamente as bactérias presentes nas infecções endodônticas. Métodos moleculares de identificação bacteriana, baseados no sequenciamento do gene 16S rRNA, são importantes e fornecem uma identificação mais fiel que métodos fenotípicos. Estudos metagenômicos são ideais para avaliação da diversidade bacteriana, possibilitando identificação de espécies que se acreditava não estarem sendo cultivadas, ou encontrar espécies que ainda não foram encontradas ou associadas com infecções endodônticas, incluindo espécies ainda não cultiváveis. O objetivo deste estudo foi investigar a diversidade bacteriana de canais radiculares de dentes com abscesso apical agudo por cultura, clonagem e sequenciamento do gene 16S rRNA, compararando a efetividade dos métodos. Foram feitas coletas microbiológicas de 20 canais radiculares utilizando cones de papel absorvente estéreis, transportados em meio VMGA III. Um total de 220 cepas isoladas, identificadas previamente por métodos bioquímicos, foram submetidas à extração de DNA, amplificação do gene 16S rRNA seguido de sequenciamento. Além disso, 10 das 20 amostras coletadas foram também submetidas à clonagem bacteriana através de Escherichia coli DH5? eletrocompetentes. As sequências de nucleotídeos obtidas foram comparadas com o banco de dados do National Center of Biotechnology Information através do BLAST. Trinta e quatro espécies diferentes foram identificadas bioquimicamente e 57 pelo sequenciamento, numa média de 6 espécies por canal. O sequenciamento permitiu identificação de 97% das bactérias isoladas (215), enquanto apenas 70,5% foram identificadas bioquimicamente (155). A concordância entre os métodos de identificação fenotípica e genotípica foi de 49% e as cepas não identificadas bioquimicamente (65/220) foram caracterizadas em 97% (63/65) pelo sequenciamento. As bactérias mais frequentemente identificadas pelo sequenciamento foram Prevotella spp., Pseudoramibacter alactolyticus, Parvimonas micra, Dialister invisus, Filifactor alocis e Peptostreptococcus stomatis. Um total de 689 clones foi analisado e 76 filotipos foram identificados, numa média de 15 por canal. Quarenta e oito espécies diferentes foram identificadas e 28 (36,84%) filotipos representados por espécies ainda não cultivadas ou não caracterizadas. Prevotella spp., Fusobacterium nucleatum, Filifactor alocis e Peptostreptococcus stomatis, foram às espécies mais frequentemente identificadas, seguidas por Dialister invisus, Parvimonas micra, Phocaeicola abscessus, Porphyromonas spp. e Lachnospiraceae oral clone. Nenhuma espécie foi encontrada em todos os casos estudados, e algumas estavam presentes em apenas 1 caso. Métodos que independem da cultura mostram que a microbiota endodôntica pode ser subestimada por estudos cultura-dependentes. Apesar de algumas espécies serem predominantes em infecções endodônticas primárias, como as anaeróbias Gram-negativas, concluímos que esta infecção é bastante complexa e heterogênea, caracterizada por uma grande diversidade bacteriana. A associação de métodos convencionais e moleculares permite um conhecimento mais acurado da microbiota endodôntica (AU)

• Processo FAPESP: 09/07760-5 - INVESTIGAÇÃO DA MICROBIOTA DE CANAIS RADICULARES INFECTADOS DE DENTES SINTIMÁTICOS E COM LESÃO PERIAPICAL POR CULTURA, CLONAGEM E SEQUENCIAMENTO DO GENE 16S rRNA.
• Beneficiário: Letícia Maria Menezes Nóbrega
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado