Transformação genética de maracujazeiro (Passiflora alata Curtis) para resistência ao Cowpea aphid-borne mosaic virus (CABMV)

Autor(es)

Ana Paula Chiaverini Pinto

• Tipo de documento: Dissertação de Mestrado
• Imprenta: Piracicaba.
• Instituição: Universidade de São Paulo (USP). Centro de Energia Nuclear na Agricultura (CENA/STB)
• Data de defesa: 2010-08-30

Membros da banca

Adriana Pinheiro Martinelli; Helaine Carrer; Jorge Alberto Marques Rezende

• Orientador: Beatriz Madalena Januzzi Mendes

Resumo

Uma das espécies que atualmente vem despertando interesse econômico por seu elevado valor de mercado é o maracuzajeiro doce (Passiflora alata Curtis). Entretanto, a cultura é afetada por diferentes doenças que prejudicam a produtividade e a qualidade dos frutos, sendo a doença causada pelo Cowpea aphid-borne mosaic virus (CABMV) a que mais afeta a cultura do maracujazeiro no Brasil. O presente trabalho teve como objetivo a obtenção de plantas transgênicas de P. alata visando resistência ao CABMV. O processo de transformação genética utilizado foi via Agrobacterium tumefaciens, estirpe EHA105, contendo o cassete de expressão com um fragmento do gene da proteína capsidial do CABMV, numa construção tipo hairpin e o gene de seleção nptII que confere resistência ao antibiótico canamicina. Para os experimentos de transformação genética foram utilizados como explantes segmentos de hipocótilo e segmentos internodais. Após 2 a 3 dias de co-cultivo em meio de cultura MS (MURASHIGE; SKOOG, 1962) contendo acetosseringona (100 mM), os explantes foram transferidos para meio de cultura de seleção e regeneração constituído de sais minerais e vitaminas de MS, suplementado com benzilaminopurina (BAP - 1mg/L) + thidiazuron (TDZ - 0,5 mg/L) + canamicina (100 mg/L) + cefotaxima (500 mg/L) + nitrato de prata (4,0 mg/L), pH 5,8. Após 4 a 6 semanas de incubação, determinou-se o número de explantes responsivos e as gemas adventícias desenvolvidas foram transferidas para meio de cultura de alongamento MSM + GA3 (1,0 mg/L) + cefotaxima (500 mg/L) + nitrato de prata (4,0 mg/L). As plantas desenvolvidas foram aclimatizadas e analisadas por PCR, utilizando primers específicos para a detecção do fragmento do gene da proteína capsidial do CABMV e do gene de seleção (nptII). Foram identificadas 47 plantas transgênicas PCR positivas para do gene nptII. Até o momento, a integração do gene nptII foi confirmada por Southern blot em 9 plantas (AU)

• Processo FAPESP: 07/06875-8 - Transformação genética de maracujá-doce (Passiflora alata Curtis) para resistência ao Cowpea aphid-borne mosaic virus (CABMV).
• Beneficiário: Ana Paula Chiaverini Pinto
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado