Aplicação de derivados de quitosana como agentes de transfecção para transferência gênica não viral

Autor(es)

Isadora Pfeifer Dalla Picola

• Tipo de documento: Tese de Doutorado
• Imprenta: São José do Rio Preto. 2014-11-10.
• Instituição: Universidade Estadual Paulista (Unesp). Instituto de Biociências Letras e Ciências Exatas. São José do Rio Preto
• Data de defesa: 2013-09-13
• Orientador: Marcio José Tiera

Resumo

Uma possível estratégia para aumentar a eficiência de transfecção gênica da quitosana como vetor não viral é a modificação desse policátion com adição de grupos hidrofílicos, sensíveis ao pH e seletivos quanto às células alvo, sem interferir nas propriedades biológicas da quitosana, como biodegradabilidade e baixa toxicidade. Nesse tema, a presente tese teve como objetivo a modificação da estrutura da quitosana com grupos fosforilcolina (PC), dietilaminoetila (DEAE) e o ligante folato (FA). Derivados de quitosana com diferentes proporções de grupos PC e DEAE foram sintetizados e caracterizados utilizando-se RMN de 1H, titulação condutimétrica, Cromatografia de permeação em gel e espectroscopia UV-vis. Os derivados foram utilizados para a preparação de poliplexos com o plasmídeo VR1412 e com o RNA de interferência siRNA-SSB. Esses poliplexos preparados foram caracterizados por espalhamento de luz dinâmico, obtendo-se nanopartículas (NPs) cujos diâmetros variaram de 100 nm a 700 nm, e com valores de potencial zeta de -25 mV a +22 mV, dependentes dos graus de substituição de PC e DEAE. A estabilidade das partículas e a integridade do plasmídeo foram verificadas a partir de eletroforese em gel de agarose, observando-se maior estabilidade para maiores razões N/P (N = grupos amina do policátion; P = grupos fosfato do pDNA ou siRNA), e para os polímeros de maior massa molecular e substituídos com o grupo DEAE. Células HeLa foram utilizadas para analisar a citotoxicidade dos poliplexos e polímeros, bem como a eficiência de transfeção. Os resultados mostraram que a citotoxicidade dos derivados aumenta com o grau de substituição por DEAE. Entretanto, a composição pode ser controlada e todos os derivados foram menos tóxicos que o lipídeo comercial lipofetamina, lipídeo geralmente utilizado para transferência gênica. A eficiência de transfecção foi altamente intensificada com as modificações ... (AU)

• Processo FAPESP: 10/09651-6 - Síntese e Estudos de Transfecção de nanocarreadores sítio-dirigidos de genes
• Beneficiário: Isadora Pfeifer Dalla Picola
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado