Investigação de elementos regulatórios do éxon 14 do gene Fmr1 e análise de expressão de suas isoformas

Autor(es)

Juliana da Cruz Corrêa

• Tipo de documento: Tese de Doutorado
• Imprenta: São Paulo.
• Instituição: Universidade de São Paulo (USP). Instituto de Biociências (IBIOC/SB)
• Data de defesa: 2014-06-06

Membros da banca

Luciana Amaral Haddad; Lygia da Veiga Pereira Carramaschi; Isaias Glezer; Regina Celia Mingroni Netto; Eduardo Moraes Rego Reis

• Orientador: Luciana Amaral Haddad

Resumo

A proteína do retardo mental do X frágil (FMRP), codificada pelo gene do Retardo Mental do X Frágil (do inglês, Fragile Mental Retardation 1, FMR1) associa-se a RNA e transita entre o núcleo celular, grânulos citoplasmáticos e polirribossomos. No SNC, tem um importante papel como reguladora traducional atuando na maturação e eliminação sináptica. A exclusão do éxon 14 de transcritos do FMR1, associada ao uso do terceiro sítio de splicing do éxon 15 do FMR1, acarreta mudança da fase de leitura dos códons subsequentes, produzindo potencialmente isoformas da FMRP com nova região C-terminal, sem o sinal de localização nuclear e o domínio RGG, principal efetor de sua associação a RNAs. Sua importância funcional ainda não foi estudada. Neste trabalho, avaliamos por RT-qPCR a expressão dos transcritos que incluem e excluem o éxon 14 do Fmr1 no SNC de ratos e identificamos o córtex cerebral no décimo nono dia embrionário (E19) e no segundo dia pós-natal (P2) como tecido e fases do desenvolvimento em que são observados transcritos do Fmr1 com junção entre o éxon 13 e o terceiro sítio de splicing do éxon 15. Demonstramos que transcritos com essa junção exônica associam-se à proteína 4E de iniciação da tradução de eucarioto (eIF4E), indicando sua estabilidade no citoplasma. Geramos um anticorpo que identifica proteína de fusão com nova região C-terminal da FMRP. Paralelamente, a triagem por elementos em cis (transcritos) e fatores proteicos em trans trouxeram candidatos a inibirem o splicing do éxon 14 do FMR1 (AU)

• Processo FAPESP: 09/51297-8 - Investigacao de elementos regulatorios do splicing alternativo do exon 14 do gene do retardo mental do x fragil (fmr1) e analise de expressao de suas isoformas
• Beneficiário: Juliana da Cruz Corrêa Velloso
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado