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MÉTODO PARA CLONAGEM, EXPRESSÃO E PURIFICAÇÃO DO POLIPEPTÍDEO AMILÓIDE DAS ILHOTAS PANCREÁTICAS HUMANAS

Tipo de documento:Patente
Inventor(es): Dahabada Helena José Lopes; Sérgio Teixeira Ferreira; Mari Cleide Sogayar; Theri Leica Degaki; Christian Colin
Depositante: Universidade Federal do Rio de Janeiro (UFRJ)
Data do depósito: 23 de março de 2004
Registro INPI:
PI0400735-2 - Consulta INPI
IPC: C12N 15/12 C07K 14/435 C12N 15/70 A61K 38/17 A61P 3/10
Resumo

"MÉTODO PARA CLONAGEM, EXPRESSÃO E PURIFICAÇÃO DO POLIPEPTÍDEO AMILÓIDE DAS ILHOTAS PANCREÁTICAS HUMANAS". Método para clonagem e expressão do polipeptídeo das ilhotas pancreáticas (IAPP) maduro humano sob a forma recombinante, utilizando um sistema de expressão heteróloga em Escherichia coli baseado no promotor Lacl-T7 RNA polimerase, no qual um fragmento de DNA que contém a seqüência que codifica o peptídeo maduro de IAPP é amplificado por transcrição reversa e reação em cadeia da DNA polimerase (RT-PCR) a partir de RNA total derivado de ilhotas pancreáticas humanas, clonado em vetor de expressão como descrito acima e expresso em bactérias, e método de purificação empregando-se as etapas de lise das células, centrifugação do meio e resuspensão do precipitado em presença de agente desnaturante, centrifugação da solução, remoção do material insolúvel, coleta e filtração do sobrenadante clarificado, ligação da proteína a coluna de afinidade contendo íons metálicos imobilizados, clivagem com protease e eluição da rh-IAPP em forma purificada.


Processo FAPESP: 99/06460-4 - Microencapsulamento de ilhotas pancreáticas humanas e engenharia de tecidos como alternativa terapêutica do Diabetes mellitus
Beneficiário:Mari Cleide Sogayar
Pesquisador responsável:Mari Cleide Sogayar
Instituição: Universidade de São Paulo (USP). Instituto de Química (IQ)
Linha de fomento: Auxílio à Pesquisa - Parceria para Inovação Tecnológica - PITE