Caracterizacao e clonagem do cdna codificador da profenoloxidase de "apis mellifera".

Resumo

Em insetos, a fenoloxidase (PO) desempenha importantes funções como participação na pigmentação e esclerotização, e ainda na cicatrização de ferimentos e reações de defesa. Esta enzima é encontrada na hemolinfa, como também na cutícula, como um precursor, a profenoloxidase (pro-PO). Reações peoteolíticas ativam a pro-PO através de serina- proteases. A caracterização e a purificação desta proenzima tem sido realizada em muitos insetos como em M. sexta, B. mori, H. cecropia, G. mellonella, H. diomphalia, C. erythrocephala, M. domestica, D. melanogaster, B. discoidalis, T. molitor e L. migratória. O cDNA para pro-PO em diversos insetos também tem sido caracterizado ( M. sexta, Bombyx mori, D. melanogaster, T. molitor, S. bullata, subalbatus, gambiae, H. cunea). Devido a importância deste precursor, nos propusemos clonar o cDNA para pro-PO em Apis meilifera, para posterior estudo da sua expressão ao longo do desenvolvimento. Isto será possivel com a elaboração de cDNA a partir de RNA extraído de pupas. O RNA poli (A)+ será purificado e PCRs serão feitas a partir de primers degenerados, desenhados a partir de homologias do gene para pro-PO encontradas em outros insetos. Os produtos das PCRs serão clonados e seqüenciados. O estudo da expressão será feito através de sondas utilizando-se o método de Northern Blot e a investigação da presença de mais de um gene para pro-PO, Southern blot. (AU)