Estudo de interação do adenovirus sorotipo 41 (HADV-41) com a célula hospedeira

Resumo

Os adenovírus humanos (HAdV) são associados às infecções gastrintestinais, respiratórias e oculares. Nos HAdV duas proteínas, a fibra e a penton-base, são responsáveis pelo reconhecimento da célula hospedeira. Este processo ocorre em 2 etapas: a fibra se adsorve ao receptor primário; a seguir, a penton-base interage com integrinas presentes na membrana celular, resultando na internalização da partícula viral. Adenovírus recombinantes têm sido utilizados como vetores em terapia gênica humana. Recentemente, têm sido desenvolvidos vetores derivados de proteínas virais. Entre estes está o dodecaedro de HAdV, formado por 12 unidades de penton-base Ad3 e de fibra Ad3. Este vetor mostrou-se eficaz no transporte intracelular de DNA e de proteínas. Os HAdV entéricos possuem duas fibras (longa e curta), utilizando assim uma estratégia de penetração celular diferente do protótipo HAdV-2. Este projeto visa o estudo de interação do HAdV-41 com a célula hospedeira, em particular as etapas de adsorção e penetração viral. O HAdV-41 será cultivado em células HEK-293 e purificado por gradiente de CsCI. A fibra longa e a fibra curta serão clonadas em sistema baculovírus e expressas em célula Sf21. Os dodecaedros (base Ad3+fibra Ad41) serão obtidos por co-expressão das proteínas em células Sf21 e purificadas em sacarose. Os dodecaedros serão marcados com fluoresceína e utilizados em estudos de interação vírus-célula, nas linhagens Caco2 e HEK-293. (AU)