Análise genética da função biológica da proteína glucan-binding protein B (GbpB) de Streptococcus mutans

Resumo

Os mecanismos moleculares de virulência de Streptococcus mutans, principal patógeno da cárie dentária, envolvem diversos eventos de adesão e acúmulo destas bactérias no biofilme dentário. Este processo é mediado pela síntese de glucanos extracelulares e sua interação com as proteínas extracelulares ligantes de glucano (Glucan binding proteins - Gbps). Uma dessas Gbps, a GbpB, é capaz de induzir resposta imune protetora contra cárie dentária em modelos experimentais. O objetivo deste estudo é avaliar, através de estratégias de genética molecular, a função biológica da GbpB. Para isto, pretende-se: 1) construir um mutante condicional de GbpB e 2) analisar o efeito da exposição a níveis subletais de antibióticos beta-lactâmicos na expressão de gbpB, em três genótipos distintos de S. mutans. O mutante condicional será construído através da introdução de um plasmideo contendo seqüência anti-sense de GbpB, sob controle de um promotor induzido por tetraciclina (Tet). Assim, alterações na divisão celular serão avaliadas em condições de expressão decrescentes de gbpB, por meio de reações de transcriptase reversa seguida de PCR. A presença da proteína GbpB será detectada em imuno-ensaios de dot-blot com anticorpos específicos a GbpB. A análise da exposição a níveis subletais de antibióticos beta-lactâmicos será realizada em diferentes períodos da curva de crescimento bacteriano. (AU)