Atividade de protease de podossomos em linhagem celular derivada de carcinoma adenoide cístico

Resumo

Podossomos são componentes de adesão altamente dinâmicos encontrados em diferentes tipos celulares como fibroblastos transformados, linfócitos e células de carcinoma. Apresentam-se como estruturas arredondadas, tendo no centro feixe de actina circundado por estrutura anular, formada por outras proteínas do citoesqueleto como vinculina, talina e paxilina. Sua presença tem sido observada na remodelação da matriz e na invasão tecidual de células tumorais, associados a metaloproteinases da matriz (MMPs), como MT1-MMP e MMP-9. Essas enzimas são membros do grupo metzincina de proteases, e tem como função principal a degradação de componentes estruturais da matriz extracelular. Nosso laboratório estuda biologia de neoplasias de glândulas salivares. Verificamos que linhagem celular (CAC2) derivada de carcinoma adenoide cístico expressa podossomos (Freitas et al. 2007b). Decidimos então caracterizar melhor essas especializações de membrana, que possuem potencial de atuar nos processos invasivos do carcinoma adenoide cístico. É objetivo desse trabalho estudar atividade de protease de podossomos na linhagem celular CAC2. Para tanto, serão utilizadas as técnicas de zimografia in situ e de imunofluorescência. Células serão plaqueadas em substrato fluorescente de gelatina-FITC durante 5, 10 e 15 minutos. As áreas de digestão da matriz de gelatina serão caracterizadas por regiões escuras em fundo fluorescente verde. As mesmas células que foram analisadas por zimografia in situ serão submetidas às técnicas de imunofluorescência para detecção de vinculina (proteina do podossomo) e MMPs 2 e 9. Dessa forma, em uma mesma área, observaremos a marcação de vinculina e MMPs (em azul e vermelho), enquanto que as áreas de atividade de protease serão representadas por zonas escuras (digestão) em fundo verde. A colocalização entre MMPs, vinculina e zonas de digestão caracterizará a atividade de protease dos podossomos (AU)