Disgenesia gonodal xy: identificacao de mutacoes nas regioes codificadora e promotora do gene sry e analise de seus efeitos na estrutura proteica e na expressao genica

Resumo

A expressão normal do gene SRY durante a vida intra-uterina induz as gônadas indiferenciadas a se transformarem em testículos a partir da diferenciação das células de Sertoli primordiais em células adultas. Desta maneira, mutações no gene SRY em indivíduos 46,XY causam disgenesia gonadal. Entretanto, em alguns casos deste distúrbio não foram encontradas mutações na região codificante do gene. Com o intuito de esclarecer os mecanismos moleculares responsáveis por estes casos, estudos da região 5' não traduzida do gene SRY revelaram sítios de ligação a fatores de transcrição altamente conservados no genoma de diferentes espécies. Entre os sítios consenso detectados, dois deles interagem com o fator ubiquitinante Spl e foram então chamados Sp1A e Sp1B intercalados por um sítio WT1. Em um estudo recente foi detectada a deleção de três nucleotídeos no sítio Sp1A de um indivíduo com disgenesia gonadal pura. Outros membros da família apresentavam ambigüidade genital e seu pai, também portador da mutação, possuía grave hipospadia ao nascimento. Outra mutação foi anteriormente identificada em uma paciente com disgenesia gonadal pura: a E89K, esta dentro do HMG-Box. Para tentar esclarecer os efeitos destas mutações: 1) nos mecanismos moleculares de regulação da expressão do gene SRY; 2) no papel regulador da proteína SRY, respectivamente. Este trabalho visará: 1) a analise da interação da proteína Sp1 com os sítios localizados na região promotora de SRY e o efeito da mutação nesta interação, complementando, será analisado o efeito da mutação na expressão através de ensaio com gene-repórter; 2) a análise da ligação da proteína SRY com a mutação E89K no seu DNA-alvo. Além disso, serão investigadas mutações em novos casos. (AU)